农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2003年
5期
520-524
,共5页
李桂兰%祝建洪%孙建%吴作为%王隆飞%晏晶%陈功%姜洪州%李明刚
李桂蘭%祝建洪%孫建%吳作為%王隆飛%晏晶%陳功%薑洪州%李明剛
리계란%축건홍%손건%오작위%왕륭비%안정%진공%강홍주%리명강
无花果曲酶%植酸酶%phyA基因%酿酒酵母%表达
無花果麯酶%植痠酶%phyA基因%釀酒酵母%錶達
무화과곡매%식산매%phyA기인%양주효모%표체
用RT-PCR方法从无花果曲酶(Aspcrgillus ficuum 3.4322)中扩增出1条约1.4kb的特异性条带,并将其克隆到pMD18-T载体中.DNA序列测定表明,目的片段为不含信号肽的植酸酶编码序列,全长1 347bp,编码448个氨基酸.该基因序列已在GenBank注册(注册号为:AF537344).将该基因克隆到酵母表达载体pYES2中,构建成不带信号肽phyA基因的重组表达载体pYPA2.用醋酸锂法将pYPA2转进Ura缺陷型的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiaeINVScl),筛选获得含植酸酶基因的酵母转化子.经半乳糖诱导表达后,用磷钼蓝显色(AMES)法对酵母菌体进行酶活性测定,测出了明显的植酸酶活性,pYPA2胞内植酸酶活性约11.55U/L,表明无花果曲酶phyA基因能在酿酒酵母中表达.
用RT-PCR方法從無花果麯酶(Aspcrgillus ficuum 3.4322)中擴增齣1條約1.4kb的特異性條帶,併將其剋隆到pMD18-T載體中.DNA序列測定錶明,目的片段為不含信號肽的植痠酶編碼序列,全長1 347bp,編碼448箇氨基痠.該基因序列已在GenBank註冊(註冊號為:AF537344).將該基因剋隆到酵母錶達載體pYES2中,構建成不帶信號肽phyA基因的重組錶達載體pYPA2.用醋痠鋰法將pYPA2轉進Ura缺陷型的釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiaeINVScl),篩選穫得含植痠酶基因的酵母轉化子.經半乳糖誘導錶達後,用燐鉬藍顯色(AMES)法對酵母菌體進行酶活性測定,測齣瞭明顯的植痠酶活性,pYPA2胞內植痠酶活性約11.55U/L,錶明無花果麯酶phyA基因能在釀酒酵母中錶達.
용RT-PCR방법종무화과곡매(Aspcrgillus ficuum 3.4322)중확증출1조약1.4kb적특이성조대,병장기극륭도pMD18-T재체중.DNA서렬측정표명,목적편단위불함신호태적식산매편마서렬,전장1 347bp,편마448개안기산.해기인서렬이재GenBank주책(주책호위:AF537344).장해기인극륭도효모표체재체pYES2중,구건성불대신호태phyA기인적중조표체재체pYPA2.용작산리법장pYPA2전진Ura결함형적양주효모(Saccharomyces cerevisiaeINVScl),사선획득함식산매기인적효모전화자.경반유당유도표체후,용린목람현색(AMES)법대효모균체진행매활성측정,측출료명현적식산매활성,pYPA2포내식산매활성약11.55U/L,표명무화과곡매phyA기인능재양주효모중표체.
