免疫学杂志
免疫學雜誌
면역학잡지
IMMUNOLOGICAL JOURNAL
2003年
5期
397-400,405
,共5页
韩苇%赵宁%颜真%石继宏%张英起
韓葦%趙寧%顏真%石繼宏%張英起
한위%조저%안진%석계굉%장영기
TNF-α%鸡卵清溶菌酶%T辅助细胞表位序列%免疫抑制剂
TNF-α%鷄卵清溶菌酶%T輔助細胞錶位序列%免疫抑製劑
TNF-α%계란청용균매%T보조세포표위서렬%면역억제제
目的用鸡卵清溶菌酶(Hen egg-white lysozyme,HEL)T辅助细胞表位序列替换hTNF-α3'末端序列,构建和表达hTNF-α新型免疫抑制剂.方法将重组的hTNF-α HEL克隆、表达、纯化后进行初步的生物学活性鉴定.结果DNA测序分析表明,重组的hTNF-α HEL3'末端序列与设计序列完全相同.将其插入pBV220表达载体中,重组菌经42℃诱导4 h做SDS-PAGE分析,结果显示该免疫抑制剂获得了表达,Mr为17 000,其表达量为菌体总蛋白量的30%.Western blot结果证实,该表达蛋白可与抗TNF-α抗体产生免疫反应.对该表达蛋白进行了阴离子交换柱纯化,获得的重组蛋白的纯度可达95%以上.对该蛋白的体外杀伤活性检测表明,该蛋白已完全丧失了TNF-α的体外杀伤活性.结论上述实验结果证明,TNF-α免疫抑制剂的构建获得了成功,该免疫抑制剂既保持了与TNF-α抗体结合的能力又失去了TNF-α的杀伤活性,为其下一步治疗作用的研究奠定了基础.
目的用鷄卵清溶菌酶(Hen egg-white lysozyme,HEL)T輔助細胞錶位序列替換hTNF-α3'末耑序列,構建和錶達hTNF-α新型免疫抑製劑.方法將重組的hTNF-α HEL剋隆、錶達、純化後進行初步的生物學活性鑒定.結果DNA測序分析錶明,重組的hTNF-α HEL3'末耑序列與設計序列完全相同.將其插入pBV220錶達載體中,重組菌經42℃誘導4 h做SDS-PAGE分析,結果顯示該免疫抑製劑穫得瞭錶達,Mr為17 000,其錶達量為菌體總蛋白量的30%.Western blot結果證實,該錶達蛋白可與抗TNF-α抗體產生免疫反應.對該錶達蛋白進行瞭陰離子交換柱純化,穫得的重組蛋白的純度可達95%以上.對該蛋白的體外殺傷活性檢測錶明,該蛋白已完全喪失瞭TNF-α的體外殺傷活性.結論上述實驗結果證明,TNF-α免疫抑製劑的構建穫得瞭成功,該免疫抑製劑既保持瞭與TNF-α抗體結閤的能力又失去瞭TNF-α的殺傷活性,為其下一步治療作用的研究奠定瞭基礎.
목적용계란청용균매(Hen egg-white lysozyme,HEL)T보조세포표위서렬체환hTNF-α3'말단서렬,구건화표체hTNF-α신형면역억제제.방법장중조적hTNF-α HEL극륭、표체、순화후진행초보적생물학활성감정.결과DNA측서분석표명,중조적hTNF-α HEL3'말단서렬여설계서렬완전상동.장기삽입pBV220표체재체중,중조균경42℃유도4 h주SDS-PAGE분석,결과현시해면역억제제획득료표체,Mr위17 000,기표체량위균체총단백량적30%.Western blot결과증실,해표체단백가여항TNF-α항체산생면역반응.대해표체단백진행료음리자교환주순화,획득적중조단백적순도가체95%이상.대해단백적체외살상활성검측표명,해단백이완전상실료TNF-α적체외살상활성.결론상술실험결과증명,TNF-α면역억제제적구건획득료성공,해면역억제제기보지료여TNF-α항체결합적능력우실거료TNF-α적살상활성,위기하일보치료작용적연구전정료기출.
