CAJ | 학술논문

将猪肌生成抑制素编码序列下游883～1 126 bp按大肠杆菌嗜好密码子进行优化,将优化后序列双链分成12个单链片段(F1、F2、F3、R6、R5、R4、F4、F5、F6、R3、R2、R1),采用化学合成方法合成,每对相邻互补片段之间有20 bp序列交叉重叠.F1长38 bp,R1长36 bp,其他片段均40bp长,F1和R1片段两端分别加上限制性内切酶Nco I和Xho I的识别位点序列.经PCR扩增出254 bp片段,该片段与pMD18-T载体连接,转化JM109感受态细胞,所得阳性克隆进行测序分析,得到的克隆序列与设计的序列完全一致,表明成功地获得了猪肌生成抑制素下游编码序列克隆载体.从阳性细菌中提取质粒,经Nc0 I和Xho I酶切,回收254 bp目的片段,定向克隆到pET28a中,转化DH5.受体菌,提取质粒,再转化到BL21(DE3)中,成功筛选出阳性克隆.阳性菌经IPTG诱导,通过SDS PAGE,检测出猪肌生成抑制素的表达.
장저기생성억제소편마서렬하유883～1 126 bp안대장간균기호밀마자진행우화,장우화후서렬쌍련분성12개단련편단(F1、F2、F3、R6、R5、R4、F4、F5、F6、R3、R2、R1),채용화학합성방법합성,매대상린호보편단지간유20 bp서렬교차중첩.F1장38 bp,R1장36 bp,기타편단균40bp장,F1화R1편단량단분별가상한제성내절매Nco I화Xho I적식별위점서렬.경PCR확증출254 bp편단,해편단여pMD18-T재체련접,전화JM109감수태세포,소득양성극륭진행측서분석,득도적극륭서렬여설계적서렬완전일치,표명성공지획득료저기생성억제소하유편마서렬극륭재체.종양성세균중제취질립,경Nc0 I화Xho I매절,회수254 bp목적편단,정향극륭도pET28a중,전화DH5.수체균,제취질립,재전화도BL21(DE3)중,성공사선출양성극륭.양성균경IPTG유도,통과SDS PAGE,검측출저기생성억제소적표체.