生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2001年
5期
548-552
,共5页
周虎%赵惠仁%裴冬生%陆梁%胡书群
週虎%趙惠仁%裴鼕生%陸樑%鬍書群
주호%조혜인%배동생%륙량%호서군
小鼠白细胞介素18%克隆%表达%纯化%复性%H22肝癌
小鼠白細胞介素18%剋隆%錶達%純化%複性%H22肝癌
소서백세포개소18%극륭%표체%순화%복성%H22간암
用RT-PCR从小鼠肝脏细胞中扩增出小鼠白细胞介素18(mIL-18)的cDNA,克隆到表达载体aJW2中,经热诱导后在大肠杆菌JM109中表达.表达的重组mIL-18(rmIL-18)主要以包涵体形式存在,占菌体总蛋白质的18%.包涵体用5 mol/L尿素溶解后,经Sephadex G-100柱纯化.纯化的蛋白质经透析复性,在0.5 mg/L Con A存在的条件下,能够对小鼠脾细胞具有剂量依赖的IFN-γ诱生作用.以1×105H22肝癌细胞腹腔注射昆明小鼠,构建小鼠H22肝癌腹水瘤模型.分别在肿瘤细胞接种后1、4和8d,用10μg纯化产物对荷瘤小鼠进行腹腔注射.结果显示rmIL-18注射组小鼠死亡速率延缓,生存率显著提高(P＜0.01),达到62.5%.首次证明mIL-18对小鼠H22肝癌具有显著的抑制作用,经rmIL-18作用后存活小鼠具有对H22肝癌细胞的免疫记忆性.
用RT-PCR從小鼠肝髒細胞中擴增齣小鼠白細胞介素18(mIL-18)的cDNA,剋隆到錶達載體aJW2中,經熱誘導後在大腸桿菌JM109中錶達.錶達的重組mIL-18(rmIL-18)主要以包涵體形式存在,佔菌體總蛋白質的18%.包涵體用5 mol/L尿素溶解後,經Sephadex G-100柱純化.純化的蛋白質經透析複性,在0.5 mg/L Con A存在的條件下,能夠對小鼠脾細胞具有劑量依賴的IFN-γ誘生作用.以1×105H22肝癌細胞腹腔註射昆明小鼠,構建小鼠H22肝癌腹水瘤模型.分彆在腫瘤細胞接種後1、4和8d,用10μg純化產物對荷瘤小鼠進行腹腔註射.結果顯示rmIL-18註射組小鼠死亡速率延緩,生存率顯著提高(P＜0.01),達到62.5%.首次證明mIL-18對小鼠H22肝癌具有顯著的抑製作用,經rmIL-18作用後存活小鼠具有對H22肝癌細胞的免疫記憶性.
용RT-PCR종소서간장세포중확증출소서백세포개소18(mIL-18)적cDNA,극륭도표체재체aJW2중,경열유도후재대장간균JM109중표체.표체적중조mIL-18(rmIL-18)주요이포함체형식존재,점균체총단백질적18%.포함체용5 mol/L뇨소용해후,경Sephadex G-100주순화.순화적단백질경투석복성,재0.5 mg/L Con A존재적조건하,능구대소서비세포구유제량의뢰적IFN-γ유생작용.이1×105H22간암세포복강주사곤명소서,구건소서H22간암복수류모형.분별재종류세포접충후1、4화8d,용10μg순화산물대하류소서진행복강주사.결과현시rmIL-18주사조소서사망속솔연완,생존솔현저제고(P＜0.01),체도62.5%.수차증명mIL-18대소서H22간암구유현저적억제작용,경rmIL-18작용후존활소서구유대H22간암세포적면역기억성.
