中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2000年
6期
716-721
,共6页
腺病毒%白介素12%同源重组%细菌
腺病毒%白介素12%同源重組%細菌
선병독%백개소12%동원중조%세균
利用细菌内同源重组法构建含mIL-12双顺反子重组腺病毒载体,其中由polio IRES连接的mIL-12 p40和p35双亚基目的基因片段用Not I+Xho I酶自真核表达载体pcDNA3/mIL-12中切出,亚克隆至经同样酶切的腺病毒穿梭质粒中,形成转移质粒pAdtrack-CMV/mIL-12,对之线性化后与腺病毒基因组质粒pAdeasy-1共转化BJ5183菌,抽提经鉴定含目的基因的重组体质粒DNA,转染293细胞,包装成重组体腺病毒Ad-mIL-12.Southern杂交证实,p40和p35基因已被克隆至Ad-mIL-12基因组中;RT-PCR结果显示,Ad-mIL-12感染的MM45T@Li肿瘤细胞中有p40和p35基因的表达,ELSA检测感染48 h细胞的上清中mIL-12的含量达88 ng每106细胞,其体外能刺激小鼠脾脏淋巴细胞的增殖,提高NK细胞活性及诱导γ干扰素的产生.结果表明,利用细菌内同源重组法制备的Ad-mIL-12重组腺病毒载体是一种方便、高效、成功率高的方法,所制备的重组体腺毒在体外能有效表达具有生物活性的mIL-12,为今后的体内应用奠定了基础.
利用細菌內同源重組法構建含mIL-12雙順反子重組腺病毒載體,其中由polio IRES連接的mIL-12 p40和p35雙亞基目的基因片段用Not I+Xho I酶自真覈錶達載體pcDNA3/mIL-12中切齣,亞剋隆至經同樣酶切的腺病毒穿梭質粒中,形成轉移質粒pAdtrack-CMV/mIL-12,對之線性化後與腺病毒基因組質粒pAdeasy-1共轉化BJ5183菌,抽提經鑒定含目的基因的重組體質粒DNA,轉染293細胞,包裝成重組體腺病毒Ad-mIL-12.Southern雜交證實,p40和p35基因已被剋隆至Ad-mIL-12基因組中;RT-PCR結果顯示,Ad-mIL-12感染的MM45T@Li腫瘤細胞中有p40和p35基因的錶達,ELSA檢測感染48 h細胞的上清中mIL-12的含量達88 ng每106細胞,其體外能刺激小鼠脾髒淋巴細胞的增殖,提高NK細胞活性及誘導γ榦擾素的產生.結果錶明,利用細菌內同源重組法製備的Ad-mIL-12重組腺病毒載體是一種方便、高效、成功率高的方法,所製備的重組體腺毒在體外能有效錶達具有生物活性的mIL-12,為今後的體內應用奠定瞭基礎.
이용세균내동원중조법구건함mIL-12쌍순반자중조선병독재체,기중유polio IRES련접적mIL-12 p40화p35쌍아기목적기인편단용Not I+Xho I매자진핵표체재체pcDNA3/mIL-12중절출,아극륭지경동양매절적선병독천사질립중,형성전이질립pAdtrack-CMV/mIL-12,대지선성화후여선병독기인조질립pAdeasy-1공전화BJ5183균,추제경감정함목적기인적중조체질립DNA,전염293세포,포장성중조체선병독Ad-mIL-12.Southern잡교증실,p40화p35기인이피극륭지Ad-mIL-12기인조중;RT-PCR결과현시,Ad-mIL-12감염적MM45T@Li종류세포중유p40화p35기인적표체,ELSA검측감염48 h세포적상청중mIL-12적함량체88 ng매106세포,기체외능자격소서비장림파세포적증식,제고NK세포활성급유도γ간우소적산생.결과표명,이용세균내동원중조법제비적Ad-mIL-12중조선병독재체시일충방편、고효、성공솔고적방법,소제비적중조체선독재체외능유효표체구유생물활성적mIL-12,위금후적체내응용전정료기출.
