北京大学学报（医学版）
北京大學學報（醫學版）
북경대학학보（의학판）
JOURNAL OF BEIJING MEDICAL UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)
2000年
4期
337-339
,共3页
范慧%莫晓宁%张颖妹%杨璐%宋泉声%范中玉%马大龙
範慧%莫曉寧%張穎妹%楊璐%宋泉聲%範中玉%馬大龍
범혜%막효저%장영매%양로%송천성%범중옥%마대룡
点突变%大肠杆菌%粒细胞集落刺激因子/分离和提纯%rhG-CSF-Ala-17
點突變%大腸桿菌%粒細胞集落刺激因子/分離和提純%rhG-CSF-Ala-17
점돌변%대장간균%립세포집락자격인자/분리화제순%rhG-CSF-Ala-17
目的:建立高效简便的人重组粒细胞集落刺激因子突变体rhG-CSF-Ala-17纯化工艺,并对其进行鉴定.方法:大肠杆菌表达的rhG-CSF-Ala-17经包涵体洗涤、变性复性后,采用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Superdex75凝胶过滤层析分离纯化.经SDS-PAGE和FPLC检测纯度,并进行N端氨基酸序列分析、比活性分析、紫外最大吸收光谱分析、内毒素检测等指标对其进行鉴定.结果:纯化后的rhG-CSF-Ala-17纯度可达99.64%,比活为1×108 U*mg-1.其N端19个氨基酸分析与预期序列一致,紫外最大吸收光谱位于280 nm,氨基酸的组成与预期结果一致,内毒素含量低于部颁标准.结论:两步层析即可获得高纯度的rhG-CSF-Ala-17重组蛋白质,为进一步的rhG-CSF-Ala-17临床前和临床研究打下了基础.
目的:建立高效簡便的人重組粒細胞集落刺激因子突變體rhG-CSF-Ala-17純化工藝,併對其進行鑒定.方法:大腸桿菌錶達的rhG-CSF-Ala-17經包涵體洗滌、變性複性後,採用DEAE Sepharose Fast Flow陰離子交換層析和Superdex75凝膠過濾層析分離純化.經SDS-PAGE和FPLC檢測純度,併進行N耑氨基痠序列分析、比活性分析、紫外最大吸收光譜分析、內毒素檢測等指標對其進行鑒定.結果:純化後的rhG-CSF-Ala-17純度可達99.64%,比活為1×108 U*mg-1.其N耑19箇氨基痠分析與預期序列一緻,紫外最大吸收光譜位于280 nm,氨基痠的組成與預期結果一緻,內毒素含量低于部頒標準.結論:兩步層析即可穫得高純度的rhG-CSF-Ala-17重組蛋白質,為進一步的rhG-CSF-Ala-17臨床前和臨床研究打下瞭基礎.
목적:건립고효간편적인중조립세포집락자격인자돌변체rhG-CSF-Ala-17순화공예,병대기진행감정.방법:대장간균표체적rhG-CSF-Ala-17경포함체세조、변성복성후,채용DEAE Sepharose Fast Flow음리자교환층석화Superdex75응효과려층석분리순화.경SDS-PAGE화FPLC검측순도,병진행N단안기산서렬분석、비활성분석、자외최대흡수광보분석、내독소검측등지표대기진행감정.결과:순화후적rhG-CSF-Ala-17순도가체99.64%,비활위1×108 U*mg-1.기N단19개안기산분석여예기서렬일치,자외최대흡수광보위우280 nm,안기산적조성여예기결과일치,내독소함량저우부반표준.결론:량보층석즉가획득고순도적rhG-CSF-Ala-17중조단백질,위진일보적rhG-CSF-Ala-17림상전화림상연구타하료기출.
