CAJ | 학술논문

首次用花生半胚作为外植体,与农杆菌EHA105(含质粒p1301HBs)共培养5 d,再生培养基中通过加入潮霉素进行抗性筛选,得到抗潮霉素的芽,经芽的伸长、诱导生根获得转化植株.经PCR、PCR-Southern杂交、Southern点杂交等分子检测,证实目的基因已整合到花生基因组中,ELISA检测证实了在花生中表达的HBsAg具有较好的活性.经初步定量,花生小芽的蛋白初提液中可溶性蛋白含量1.044 g/L,HBsAg小蛋白的含量约占总可溶性蛋白的0.032%,每克转化植株小芽鲜重含HBsAg小蛋白约2.4×10-7 g.转基因花生植株初提重组蛋白经HPLC纯化、浓缩后,注射初免一次的小鼠,有明显的特异性抗体产生.口服饲喂已免疫但抗体下降至0.025(HBsAb ELISA D值)Balb/c小鼠,发现有较强的抗体回升,达3.54,表明转基因花生疫苗可以加强口服免疫.
수차용화생반배작위외식체,여농간균EHA105(함질립p1301HBs)공배양5 d,재생배양기중통과가입조매소진행항성사선,득도항조매소적아,경아적신장、유도생근획득전화식주.경PCR、PCR-Southern잡교、Southern점잡교등분자검측,증실목적기인이정합도화생기인조중,ELISA검측증실료재화생중표체적HBsAg구유교호적활성.경초보정량,화생소아적단백초제액중가용성단백함량1.044 g/L,HBsAg소단백적함량약점총가용성단백적0.032%,매극전화식주소아선중함HBsAg소단백약2.4×10-7 g.전기인화생식주초제중조단백경HPLC순화、농축후,주사초면일차적소서,유명현적특이성항체산생.구복사위이면역단항체하강지0.025(HBsAb ELISA D치)Balb/c소서,발현유교강적항체회승,체3.54,표명전기인화생역묘가이가강구복면역.