CAJ | 학술논문

地中海拟无枝菌酸菌U32是力复霉素SV的工业产生菌,其遗传操作一直是一个难题.在该菌株DNA高效电转化的基础上,利用同源重组的原理,建立了地中海拟无枝菌酸菌染色体的基因置换/中断系统.通过大肠杆菌重组质粒pDK110构建、转化及两步重组筛选,成功地用α-淀粉酶基因(amy)取代了地中海拟无枝菌酸菌U32染色体上的3-氨基-5-羟基苯甲酸合成酶基因(ahbas).第一步单交换和第二步双交换的频率分别是0.5%～0.7%和2%.将质粒pDK110变性后转化可显著提高重组频率,在第二步筛选双交换前对单交换重组子进行电击也能够提高其双交换重组的频率.此外,通过转化构建的两端带同源区段的线性DNA片段及一步重组筛选,我们在地中海拟无枝菌酸菌U32染色体的amrD,rifO基因中间插入了阿普拉霉素抗性基因(apr),其效率约为30～50转化子/μgDNA.
지중해의무지균산균U32시력복매소SV적공업산생균,기유전조작일직시일개난제.재해균주DNA고효전전화적기출상,이용동원중조적원리,건립료지중해의무지균산균염색체적기인치환/중단계통.통과대장간균중조질립pDK110구건、전화급량보중조사선,성공지용α-정분매기인(amy)취대료지중해의무지균산균U32염색체상적3-안기-5-간기분갑산합성매기인(ahbas).제일보단교환화제이보쌍교환적빈솔분별시0.5%～0.7%화2%.장질립pDK110변성후전화가현저제고중조빈솔,재제이보사선쌍교환전대단교환중조자진행전격야능구제고기쌍교환중조적빈솔.차외,통과전화구건적량단대동원구단적선성DNA편단급일보중조사선,아문재지중해의무지균산균U32염색체적amrD,rifO기인중간삽입료아보랍매소항성기인(apr),기효솔약위30～50전화자/μgDNA.