免疫学杂志
免疫學雜誌
면역학잡지
IMMUNOLOGICAL JOURNAL
2002年
3期
221-224
,共4页
周虎%陆梁%裴冬生%赵惠仁
週虎%陸樑%裴鼕生%趙惠仁
주호%륙량%배동생%조혜인
白细胞介素-18%逆转录病毒载体%克隆
白細胞介素-18%逆轉錄病毒載體%剋隆
백세포개소-18%역전록병독재체%극륭
目的构建小鼠白细胞介素-18(mIL-18)逆转录病毒载体,实现mIL-18在小鼠H22肝癌细胞中表达.方法用RT-PCR方法从小鼠肝脏细胞中扩增出mIL-18 cDNA,克隆到载体pBluscript中,测序后亚克隆到逆转录病毒载体pLNCX中.pLNCX/mIL-18重组子用脂质体介导的方法转染PA317包装细胞,用400μg/mL G418进行筛选.挑取筛选得到的阳性克隆扩大培养,取上清感染NIH3T3细胞和H22肝癌细胞.用感染后的H22细胞上清诱导小鼠脾细胞IFN-γ生成能力来检测H22细胞分泌mIL-18的情况.结果用NIH3T3细胞测得病毒滴度为1.5×105克隆形成单位CFU/mL,转染后的H22肝癌细胞上清对小鼠脾细胞具有显著的IFN-γ诱生作用.结论pLNCX/mIL-18重组子构建成功,初步证明转染后的H22肝癌细胞能够表达IL-18.
目的構建小鼠白細胞介素-18(mIL-18)逆轉錄病毒載體,實現mIL-18在小鼠H22肝癌細胞中錶達.方法用RT-PCR方法從小鼠肝髒細胞中擴增齣mIL-18 cDNA,剋隆到載體pBluscript中,測序後亞剋隆到逆轉錄病毒載體pLNCX中.pLNCX/mIL-18重組子用脂質體介導的方法轉染PA317包裝細胞,用400μg/mL G418進行篩選.挑取篩選得到的暘性剋隆擴大培養,取上清感染NIH3T3細胞和H22肝癌細胞.用感染後的H22細胞上清誘導小鼠脾細胞IFN-γ生成能力來檢測H22細胞分泌mIL-18的情況.結果用NIH3T3細胞測得病毒滴度為1.5×105剋隆形成單位CFU/mL,轉染後的H22肝癌細胞上清對小鼠脾細胞具有顯著的IFN-γ誘生作用.結論pLNCX/mIL-18重組子構建成功,初步證明轉染後的H22肝癌細胞能夠錶達IL-18.
목적구건소서백세포개소-18(mIL-18)역전록병독재체,실현mIL-18재소서H22간암세포중표체.방법용RT-PCR방법종소서간장세포중확증출mIL-18 cDNA,극륭도재체pBluscript중,측서후아극륭도역전록병독재체pLNCX중.pLNCX/mIL-18중조자용지질체개도적방법전염PA317포장세포,용400μg/mL G418진행사선.도취사선득도적양성극륭확대배양,취상청감염NIH3T3세포화H22간암세포.용감염후적H22세포상청유도소서비세포IFN-γ생성능력래검측H22세포분비mIL-18적정황.결과용NIH3T3세포측득병독적도위1.5×105극륭형성단위CFU/mL,전염후적H22간암세포상청대소서비세포구유현저적IFN-γ유생작용.결론pLNCX/mIL-18중조자구건성공,초보증명전염후적H22간암세포능구표체IL-18.
