中山医科大学学报
中山醫科大學學報
중산의과대학학보
ACADEMIC JOURNAL OF SUN YAT-SEN UNIVERSITY OF MEDICAL SCIENCES
2002年
1期
17-20
,共4页
单志新%余新炳%马长玲%卞国武%吴忠道%徐劲
單誌新%餘新炳%馬長玲%卞國武%吳忠道%徐勁
단지신%여신병%마장령%변국무%오충도%서경
疟原虫,恶性%抗原,Pf332%克隆%表达
瘧原蟲,噁性%抗原,Pf332%剋隆%錶達
학원충,악성%항원,Pf332%극륭%표체
[目的] 构建含恶性疟原虫Pf332抗原基因片段的重组质粒,并检测在大肠杆菌BL21/DE3中的表达情况.[方法] 应用PCR技术从FCC1/HN株基因组DNA中扩增Pf332基因(Pf332)片段,P332-R0、P332-R1、P332-R2,并分别插入pGEX-4T-1原核表达载体,阳性克隆的重组质粒DNA经酶切及PCR扩增鉴定.用DNAstar软件对FCC1/HN株与3D7株Pf332的P332-R1、P332-R2片段进行同源性比较.由IPTG诱导在大肠杆菌BL21/DE3中表达重组蛋白.[结果] PCR扩增得到特异的FCC1/HN株Pf332片段,P332-R0、P332-R1、P332-R2,大小分别为489、429和393 bp.酶切及PCR鉴定获得了正确的pGEX-P332-R0、pGEX-P332-R1、pGEX-P332-R2重组质粒.序列分析结果显示,与3D7株相比,FCC1/HN株P332-R1、P332-R2片段编码多肽分别缺少2、4个相应的重复单元.在大肠杆菌BL21/DE3中表达出3个重组蛋白,相对分子质量分别为46、44和42.[结论] 扩增、克隆了恶性疟原虫Pf332片段,P332-R0、P332-R1、P332-R2,并在大肠杆菌BL21/DE3中成功表达.FCC1/HN株与3D7株的P332-R1、P332-R2片段编码多肽所包含的重复单元数目不同.
[目的] 構建含噁性瘧原蟲Pf332抗原基因片段的重組質粒,併檢測在大腸桿菌BL21/DE3中的錶達情況.[方法] 應用PCR技術從FCC1/HN株基因組DNA中擴增Pf332基因(Pf332)片段,P332-R0、P332-R1、P332-R2,併分彆插入pGEX-4T-1原覈錶達載體,暘性剋隆的重組質粒DNA經酶切及PCR擴增鑒定.用DNAstar軟件對FCC1/HN株與3D7株Pf332的P332-R1、P332-R2片段進行同源性比較.由IPTG誘導在大腸桿菌BL21/DE3中錶達重組蛋白.[結果] PCR擴增得到特異的FCC1/HN株Pf332片段,P332-R0、P332-R1、P332-R2,大小分彆為489、429和393 bp.酶切及PCR鑒定穫得瞭正確的pGEX-P332-R0、pGEX-P332-R1、pGEX-P332-R2重組質粒.序列分析結果顯示,與3D7株相比,FCC1/HN株P332-R1、P332-R2片段編碼多肽分彆缺少2、4箇相應的重複單元.在大腸桿菌BL21/DE3中錶達齣3箇重組蛋白,相對分子質量分彆為46、44和42.[結論] 擴增、剋隆瞭噁性瘧原蟲Pf332片段,P332-R0、P332-R1、P332-R2,併在大腸桿菌BL21/DE3中成功錶達.FCC1/HN株與3D7株的P332-R1、P332-R2片段編碼多肽所包含的重複單元數目不同.
[목적] 구건함악성학원충Pf332항원기인편단적중조질립,병검측재대장간균BL21/DE3중적표체정황.[방법] 응용PCR기술종FCC1/HN주기인조DNA중확증Pf332기인(Pf332)편단,P332-R0、P332-R1、P332-R2,병분별삽입pGEX-4T-1원핵표체재체,양성극륭적중조질립DNA경매절급PCR확증감정.용DNAstar연건대FCC1/HN주여3D7주Pf332적P332-R1、P332-R2편단진행동원성비교.유IPTG유도재대장간균BL21/DE3중표체중조단백.[결과] PCR확증득도특이적FCC1/HN주Pf332편단,P332-R0、P332-R1、P332-R2,대소분별위489、429화393 bp.매절급PCR감정획득료정학적pGEX-P332-R0、pGEX-P332-R1、pGEX-P332-R2중조질립.서렬분석결과현시,여3D7주상비,FCC1/HN주P332-R1、P332-R2편단편마다태분별결소2、4개상응적중복단원.재대장간균BL21/DE3중표체출3개중조단백,상대분자질량분별위46、44화42.[결론] 확증、극륭료악성학원충Pf332편단,P332-R0、P332-R1、P332-R2,병재대장간균BL21/DE3중성공표체.FCC1/HN주여3D7주적P332-R1、P332-R2편단편마다태소포함적중복단원수목불동.
