中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2003年
5期
257-260
,共4页
贾莉玮%吕茂民%徐斯日古愣%沈永才%赵保全%章金刚
賈莉瑋%呂茂民%徐斯日古愣%瀋永纔%趙保全%章金剛
가리위%려무민%서사일고릉%침영재%조보전%장금강
人蛋白C%突变体%RT-PCR%克隆%序列
人蛋白C%突變體%RT-PCR%剋隆%序列
인단백C%돌변체%RT-PCR%극륭%서렬
目的通过对人蛋白C cDNA的定点突变,构建人蛋白C突变体cDNA,以期实现从哺乳动物细胞中直接表达出具有生物活性的人蛋白C产物.方法针对人蛋白C cDNA序列设计引物以引入突变序列,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和重组PCR方法,从人胎肝总RNA中分别钓取人蛋白C的重链和轻链,经重组PCR反应将两者连接,然后将其克隆入pGEM-T载体中,经酶切和PCR鉴定后进行测序.结果经RT-PCR和重组PCR扩增获得大小为1 374bp的cDNA片段,并成功构建了人蛋白C cDNA突变体的克隆质粒pGEM-T/mhPC,序列分析证实所引入的编码8个氨基酸短肽的核苷酸序列突变位点正确取代了人蛋白C的活性肽,获得人蛋白C突变体cD-NA的克隆.结论已成功进行了人蛋白C cDNA的突变,获得了人蛋白C cDNA突变体的克隆,为进一步进行人蛋白C突变体cDNA的表达和活性鉴定奠定了基础.
目的通過對人蛋白C cDNA的定點突變,構建人蛋白C突變體cDNA,以期實現從哺乳動物細胞中直接錶達齣具有生物活性的人蛋白C產物.方法針對人蛋白C cDNA序列設計引物以引入突變序列,採用逆轉錄聚閤酶鏈反應(RT-PCR)和重組PCR方法,從人胎肝總RNA中分彆釣取人蛋白C的重鏈和輕鏈,經重組PCR反應將兩者連接,然後將其剋隆入pGEM-T載體中,經酶切和PCR鑒定後進行測序.結果經RT-PCR和重組PCR擴增穫得大小為1 374bp的cDNA片段,併成功構建瞭人蛋白C cDNA突變體的剋隆質粒pGEM-T/mhPC,序列分析證實所引入的編碼8箇氨基痠短肽的覈苷痠序列突變位點正確取代瞭人蛋白C的活性肽,穫得人蛋白C突變體cD-NA的剋隆.結論已成功進行瞭人蛋白C cDNA的突變,穫得瞭人蛋白C cDNA突變體的剋隆,為進一步進行人蛋白C突變體cDNA的錶達和活性鑒定奠定瞭基礎.
목적통과대인단백C cDNA적정점돌변,구건인단백C돌변체cDNA,이기실현종포유동물세포중직접표체출구유생물활성적인단백C산물.방법침대인단백C cDNA서렬설계인물이인입돌변서렬,채용역전록취합매련반응(RT-PCR)화중조PCR방법,종인태간총RNA중분별조취인단백C적중련화경련,경중조PCR반응장량자련접,연후장기극륭입pGEM-T재체중,경매절화PCR감정후진행측서.결과경RT-PCR화중조PCR확증획득대소위1 374bp적cDNA편단,병성공구건료인단백C cDNA돌변체적극륭질립pGEM-T/mhPC,서렬분석증실소인입적편마8개안기산단태적핵감산서렬돌변위점정학취대료인단백C적활성태,획득인단백C돌변체cD-NA적극륭.결론이성공진행료인단백C cDNA적돌변,획득료인단백C cDNA돌변체적극륭,위진일보진행인단백C돌변체cDNA적표체화활성감정전정료기출.
