中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2005年
9期
690-693
,共4页
张天一%牛纪晓%周欣阳%林琳%顾君一
張天一%牛紀曉%週訢暘%林琳%顧君一
장천일%우기효%주흔양%림림%고군일
HSP gp96-肽复合物%纯化%H22肝癌%小鼠
HSP gp96-肽複閤物%純化%H22肝癌%小鼠
HSP gp96-태복합물%순화%H22간암%소서
目的:建立从H22肝癌细胞中提取、纯化热休克蛋白gp96-肽复合物的方法.方法:①制备H22肝癌细胞蛋白:将H22肝癌细胞裂解、离心、过滤及透析后获得.②gp96-肽复合物的纯化:上述可溶性H22肝癌细胞蛋白经分级硫酸铵盐析后,依次用ConA-Sepharose亲和层析、Sephadex G25更换缓冲液及DEAE-Sephacel离子交换层析分离纯化.③gp96-肽复合物的鉴定和浓度测定:所得蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot进行蛋白分子量及性质鉴定,Lowry法测定蛋白浓度.结果:分离、纯化得到的蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染鉴定为单一带,分子量为96 kD;Western blot结果证实为HSP gp96.每20 ml 压积H22细胞最终获得1 mg的HSP gp96.结论:使用本分离纯化方法可获得高纯度HSP gp96肽复合物.
目的:建立從H22肝癌細胞中提取、純化熱休剋蛋白gp96-肽複閤物的方法.方法:①製備H22肝癌細胞蛋白:將H22肝癌細胞裂解、離心、過濾及透析後穫得.②gp96-肽複閤物的純化:上述可溶性H22肝癌細胞蛋白經分級硫痠銨鹽析後,依次用ConA-Sepharose親和層析、Sephadex G25更換緩遲液及DEAE-Sephacel離子交換層析分離純化.③gp96-肽複閤物的鑒定和濃度測定:所得蛋白經SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳和Western blot進行蛋白分子量及性質鑒定,Lowry法測定蛋白濃度.結果:分離、純化得到的蛋白經SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳、銀染鑒定為單一帶,分子量為96 kD;Western blot結果證實為HSP gp96.每20 ml 壓積H22細胞最終穫得1 mg的HSP gp96.結論:使用本分離純化方法可穫得高純度HSP gp96肽複閤物.
목적:건립종H22간암세포중제취、순화열휴극단백gp96-태복합물적방법.방법:①제비H22간암세포단백:장H22간암세포렬해、리심、과려급투석후획득.②gp96-태복합물적순화:상술가용성H22간암세포단백경분급류산안염석후,의차용ConA-Sepharose친화층석、Sephadex G25경환완충액급DEAE-Sephacel리자교환층석분리순화.③gp96-태복합물적감정화농도측정:소득단백경SDS-취병희선알응효전영화Western blot진행단백분자량급성질감정,Lowry법측정단백농도.결과:분리、순화득도적단백경SDS-취병희선알응효전영、은염감정위단일대,분자량위96 kD;Western blot결과증실위HSP gp96.매20 ml 압적H22세포최종획득1 mg적HSP gp96.결론:사용본분리순화방법가획득고순도HSP gp96태복합물.
