CAJ | 학술논문

[目的]将A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]的HA基因插入鸡β-actin启动子高效真核表达载体pCAGGS,构建了DNA疫苗质粒pCAGGHA5,以提高H5亚型禽流感DNA疫苗的表达水平和免疫保护效果.[方法]将pCAGGHA5和表达GD/1/96(H5N1)HA基因的质粒pCIHA5通过间接免疫荧光法和Western-blot分析检测转染293T细胞后瞬时表达的HA抗原蛋白,随之将pCAGGHA5及pCIHA5分别以100 μg和10 μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,4周后用100 LD50的HPAIV GD/1/96(H5N1)鼻腔途径进行攻击.[结果]间接免疫荧光法和Western-blot分析表明2种表达质粒均可正确表达H5亚型HA抗原蛋白,载体pCAGGS表达水平显著高于载体pCI;免疫SPF鸡后,100μg pCAGGHA5可形成5/5的免疫保护,100μg pCIHA5可形成2/4的免疫保护,10μg pCAGGHA5可形成对免疫鸡5/5的免疫保护,而10μg pCIHA5 则基本不能形成免疫保护,pCAGGHA5诱导的HI抗体水平远远高于pCIHA5.[结论]鸡β-actin启动子表达载体pCAGGS可显著提高HA基因体外表达水平和H5亚型禽流感DNA疫苗诱导的保护性抗体免疫反应水平,增强免疫保护效果.
[목적]장A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]적HA기인삽입계β-actin계동자고효진핵표체재체pCAGGS,구건료DNA역묘질립pCAGGHA5,이제고H5아형금류감DNA역묘적표체수평화면역보호효과.[방법]장pCAGGHA5화표체GD/1/96(H5N1)HA기인적질립pCIHA5통과간접면역형광법화Western-blot분석검측전염293T세포후순시표체적HA항원단백,수지장pCAGGHA5급pCIHA5분별이100 μg화10 μg제량일차면역3주령SPF계,4주후용100 LD50적HPAIV GD/1/96(H5N1)비강도경진행공격.[결과]간접면역형광법화Western-blot분석표명2충표체질립균가정학표체H5아형HA항원단백,재체pCAGGS표체수평현저고우재체pCI;면역SPF계후,100μg pCAGGHA5가형성5/5적면역보호,100μg pCIHA5가형성2/4적면역보호,10μg pCAGGHA5가형성대면역계5/5적면역보호,이10μg pCIHA5 칙기본불능형성면역보호,pCAGGHA5유도적HI항체수평원원고우pCIHA5.[결론]계β-actin계동자표체재체pCAGGS가현저제고HA기인체외표체수평화H5아형금류감DNA역묘유도적보호성항체면역반응수평,증강면역보호효과.