世界华人消化杂志
世界華人消化雜誌
세계화인소화잡지
WORLD CHINESE JOURNAL OF DIGESTOLOGY
2008年
19期
2080-2085
,共6页
郭晓榕%程斌%郑要初%林松挺%黎培员
郭曉榕%程斌%鄭要初%林鬆挺%黎培員
곽효용%정빈%정요초%림송정%려배원
HBx基因%p21%p53%HepG2细胞%四唑蓝比色法%流式细胞术%免疫印迹%逆转录-聚合酶链反应
HBx基因%p21%p53%HepG2細胞%四唑藍比色法%流式細胞術%免疫印跡%逆轉錄-聚閤酶鏈反應
HBx기인%p21%p53%HepG2세포%사서람비색법%류식세포술%면역인적%역전록-취합매련반응
目的:构建转基因细胞模型HepG2/HBx,观察HBx基因对HepG2细胞增殖、周期和凋亡的影响, 探讨细胞周期蛋白P21在其中的作用和意义.方法:应用脂质体转染和G418筛选构建稳定表达HBx的转基因细胞HepG2/HBx,RT-PCR和Western blot鉴定HBx mRNA与蛋白的表达.分别以四唑蓝(MTT)比色法、流式细胞术检测HepG2/HBx细胞及对照组HepG2与HepG2/pcDNA3.1细胞(转染空载体pcDNA3.1的HepG2细胞)的增殖、周期和凋亡.另半定量RT-PCR检测各组细胞中细胞周期蛋白P21与抑癌基因p53mRNA的表达.结果:HepG2/HBx细胞中有HBx mRNA和蛋白的表达.HepG2/HBx细胞生长速度加快.HepG2/HBx中G0/G1期细胞比例较对照组显著减少(43.34%±3.11%vs57.69±4.28%,P<0.01),S期细胞比例明显增加(28.69%±1.17%vs22.41%±1.99%,P<0.05),同时还发现与对照组相比其凋亡率也显著降低(1.19%±0.06%vs 5.43%±0.42%, P<0.001).细胞周期蛋白p21 mRNA在HepG2/HBx细胞中的表达较对照组细胞显著降低(0.16±0.05vs0.78±0.15,P<0.001),而p53表达则无显著变化.结论:HBx基因可下调细胞周期蛋白P21mRNA的表达,可能参与HBx基因加速HepG2细胞周期进程、促进细胞增殖以及抑制细胞凋亡的作用.
目的:構建轉基因細胞模型HepG2/HBx,觀察HBx基因對HepG2細胞增殖、週期和凋亡的影響, 探討細胞週期蛋白P21在其中的作用和意義.方法:應用脂質體轉染和G418篩選構建穩定錶達HBx的轉基因細胞HepG2/HBx,RT-PCR和Western blot鑒定HBx mRNA與蛋白的錶達.分彆以四唑藍(MTT)比色法、流式細胞術檢測HepG2/HBx細胞及對照組HepG2與HepG2/pcDNA3.1細胞(轉染空載體pcDNA3.1的HepG2細胞)的增殖、週期和凋亡.另半定量RT-PCR檢測各組細胞中細胞週期蛋白P21與抑癌基因p53mRNA的錶達.結果:HepG2/HBx細胞中有HBx mRNA和蛋白的錶達.HepG2/HBx細胞生長速度加快.HepG2/HBx中G0/G1期細胞比例較對照組顯著減少(43.34%±3.11%vs57.69±4.28%,P<0.01),S期細胞比例明顯增加(28.69%±1.17%vs22.41%±1.99%,P<0.05),同時還髮現與對照組相比其凋亡率也顯著降低(1.19%±0.06%vs 5.43%±0.42%, P<0.001).細胞週期蛋白p21 mRNA在HepG2/HBx細胞中的錶達較對照組細胞顯著降低(0.16±0.05vs0.78±0.15,P<0.001),而p53錶達則無顯著變化.結論:HBx基因可下調細胞週期蛋白P21mRNA的錶達,可能參與HBx基因加速HepG2細胞週期進程、促進細胞增殖以及抑製細胞凋亡的作用.
목적:구건전기인세포모형HepG2/HBx,관찰HBx기인대HepG2세포증식、주기화조망적영향, 탐토세포주기단백P21재기중적작용화의의.방법:응용지질체전염화G418사선구건은정표체HBx적전기인세포HepG2/HBx,RT-PCR화Western blot감정HBx mRNA여단백적표체.분별이사서람(MTT)비색법、류식세포술검측HepG2/HBx세포급대조조HepG2여HepG2/pcDNA3.1세포(전염공재체pcDNA3.1적HepG2세포)적증식、주기화조망.령반정량RT-PCR검측각조세포중세포주기단백P21여억암기인p53mRNA적표체.결과:HepG2/HBx세포중유HBx mRNA화단백적표체.HepG2/HBx세포생장속도가쾌.HepG2/HBx중G0/G1기세포비례교대조조현저감소(43.34%±3.11%vs57.69±4.28%,P<0.01),S기세포비례명현증가(28.69%±1.17%vs22.41%±1.99%,P<0.05),동시환발현여대조조상비기조망솔야현저강저(1.19%±0.06%vs 5.43%±0.42%, P<0.001).세포주기단백p21 mRNA재HepG2/HBx세포중적표체교대조조세포현저강저(0.16±0.05vs0.78±0.15,P<0.001),이p53표체칙무현저변화.결론:HBx기인가하조세포주기단백P21mRNA적표체,가능삼여HBx기인가속HepG2세포주기진정、촉진세포증식이급억제세포조망적작용.
