生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2008年
10期
1761-1767
,共7页
昆虫神经毒素%LqhIT2%抗血清
昆蟲神經毒素%LqhIT2%抗血清
곤충신경독소%LqhIT2%항혈청
根据毕赤酵母密码子偏爱性,不改变毒素蛋白质一级结构,设计合成了昆虫神经毒素LqhIT2基因,并分别克隆至大肠杆菌融合表达载体pPET30-a(+)和毕赤酵母分泌表达载体pPIC9K.在IPTG的诱导下,神经毒素在大肠杆菌中融合表达,表达产物经镍亲和层析纯化后,用于免疫BALB/c小鼠,制备了特异性较高的抗血清,抗体滴度超过1:128 000.利用制备的抗血清,采用斑点杂交,筛选得到了较高水平分泌表达重组LqhIT2的酵母转化子,摇瓶条件下,毒素表达量约9 mg/L.大肠杆菌表达产物没有生物活性,酵母表达产物经注射蝗虫表现出杀虫活性.
根據畢赤酵母密碼子偏愛性,不改變毒素蛋白質一級結構,設計閤成瞭昆蟲神經毒素LqhIT2基因,併分彆剋隆至大腸桿菌融閤錶達載體pPET30-a(+)和畢赤酵母分泌錶達載體pPIC9K.在IPTG的誘導下,神經毒素在大腸桿菌中融閤錶達,錶達產物經鎳親和層析純化後,用于免疫BALB/c小鼠,製備瞭特異性較高的抗血清,抗體滴度超過1:128 000.利用製備的抗血清,採用斑點雜交,篩選得到瞭較高水平分泌錶達重組LqhIT2的酵母轉化子,搖瓶條件下,毒素錶達量約9 mg/L.大腸桿菌錶達產物沒有生物活性,酵母錶達產物經註射蝗蟲錶現齣殺蟲活性.
근거필적효모밀마자편애성,불개변독소단백질일급결구,설계합성료곤충신경독소LqhIT2기인,병분별극륭지대장간균융합표체재체pPET30-a(+)화필적효모분비표체재체pPIC9K.재IPTG적유도하,신경독소재대장간균중융합표체,표체산물경얼친화층석순화후,용우면역BALB/c소서,제비료특이성교고적항혈청,항체적도초과1:128 000.이용제비적항혈청,채용반점잡교,사선득도료교고수평분비표체중조LqhIT2적효모전화자,요병조건하,독소표체량약9 mg/L.대장간균표체산물몰유생물활성,효모표체산물경주사황충표현출살충활성.
