海洋与湖沼
海洋與湖沼
해양여호소
OCEANOLOGIA ET LIMNOLOGIA SINICA
2009年
1期
62-67
,共6页
宋益银%林蕾%苏秀榕%王春琳%张春丹
宋益銀%林蕾%囌秀榕%王春琳%張春丹
송익은%림뢰%소수용%왕춘림%장춘단
锯缘青蟹过敏原%SDS-PAGE%蛋白免疫印迹%层析%质谱分析
鋸緣青蟹過敏原%SDS-PAGE%蛋白免疫印跡%層析%質譜分析
거연청해과민원%SDS-PAGE%단백면역인적%층석%질보분석
采用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,对锯缘青蟹肌肉中可溶性蛋白质进行分离,以过敏患者阳性血清和正常人阴性血清作对照,通过Western blot鉴定出分子量为14.3kDa的蛋白为锯缘青蟹的特异性过敏原.然后用Sephadex G75凝胶过滤层析和DEAE-52离子交换层析纯化出该过敏原,再经MALDI-TOF/TOF-MS检测,利用Blastz在线分析.结果表明,锯缘青蟹特异性过敏原为血蓝蛋白亚基,经Clustal W分析该蛋白的多肽片段序列与可口美青蟹、邓杰内斯蟹、加州龙虾、艾氏真蟹的血蓝蛋白亚基序列有很高的同源性,经Prosite数据库检索后发现肽段1和肽段2有酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和蛋白激酶C磷酸化位点,是过敏原参与机体反应的重要活性位点.
採用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳方法,對鋸緣青蟹肌肉中可溶性蛋白質進行分離,以過敏患者暘性血清和正常人陰性血清作對照,通過Western blot鑒定齣分子量為14.3kDa的蛋白為鋸緣青蟹的特異性過敏原.然後用Sephadex G75凝膠過濾層析和DEAE-52離子交換層析純化齣該過敏原,再經MALDI-TOF/TOF-MS檢測,利用Blastz在線分析.結果錶明,鋸緣青蟹特異性過敏原為血藍蛋白亞基,經Clustal W分析該蛋白的多肽片段序列與可口美青蟹、鄧傑內斯蟹、加州龍蝦、艾氏真蟹的血藍蛋白亞基序列有很高的同源性,經Prosite數據庫檢索後髮現肽段1和肽段2有酪蛋白激酶Ⅱ燐痠化位點和蛋白激酶C燐痠化位點,是過敏原參與機體反應的重要活性位點.
채용SDS취병희선알응효전영방법,대거연청해기육중가용성단백질진행분리,이과민환자양성혈청화정상인음성혈청작대조,통과Western blot감정출분자량위14.3kDa적단백위거연청해적특이성과민원.연후용Sephadex G75응효과려층석화DEAE-52리자교환층석순화출해과민원,재경MALDI-TOF/TOF-MS검측,이용Blastz재선분석.결과표명,거연청해특이성과민원위혈람단백아기,경Clustal W분석해단백적다태편단서렬여가구미청해、산걸내사해、가주룡하、애씨진해적혈람단백아기서렬유흔고적동원성,경Prosite수거고검색후발현태단1화태단2유락단백격매Ⅱ린산화위점화단백격매C린산화위점,시과민원삼여궤체반응적중요활성위점.
