中国海洋大学学报（自然科学版）
中國海洋大學學報（自然科學版）
중국해양대학학보（자연과학판）
PERIODICAL OF OCEAN UNIVERSITY OF CHINA
2010年
9期
69-74
,共6页
樊廷俊%郭雪阳%姜国建%徐晓辉%孙爱%徐彬
樊廷俊%郭雪暘%薑國建%徐曉輝%孫愛%徐彬
번정준%곽설양%강국건%서효휘%손애%서빈
圆斑星鲽%鳃%原代培养%继代培养%细胞系
圓斑星鰈%鰓%原代培養%繼代培養%細胞繫
원반성접%새%원대배양%계대배양%세포계
为建立圆斑星鲽(Verasper variegatus)鳃细胞系,本文采用胰蛋白酶消化法启动了圆斑星鲽鳃组织的体外培养,并通过对培养液配方和培养条件的优化成功地进行了圆斑星鲽鳃细胞的原代培养和继代培养.结果显示,圆斑星鲽鳃细胞的最适培养液为含有20%胎牛血清(FBS)的DMEM/F-12培养液,培养液最适pH值为7.2,最适培养温度为22℃;通过向20%FBS-DMEM/F-12培养液(pH=7.2)中添加N-乙酰葡萄糖盐酸盐、羧甲基壳寡糖、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及Ⅰ型胰岛素样生长因子(IGF-I),在22℃成功启动了圆斑星鲽鳃细胞的原代培养,细胞的贴壁、生长和分裂状态良好,为典型的成纤维样细胞形态,30 d即可形成汇合的细胞单层;经连续继代培养后,已成功建立了连续性圆斑星鲽鳃细胞系,现已继代培养至第76代;该细胞系细胞经液氮冻存复苏后仍保持其原有的成纤维样细胞形态,其贴壁生长状态和增殖速度也与冻存前无差异;生长特性鉴定结果显示,第60代圆斑星鲽鳃细胞系细胞的群体倍增时间为43.6 h,表明细胞的生长分裂依然十分旺盛.染色体分析结果显示,圆斑星鲽鳃细胞系细胞虽然出现了染色体的非整倍性,但其特征性染色体数目仍为46条,并具有其典型的二倍体核型特征(46 t),表明所建立的细胞系确为圆斑星鲽鳃细胞系.该细胞系的建立对于病毒与宿主相互作用机理的研究及病毒疫苗的开发具有重要的理论和应用价值.
為建立圓斑星鰈(Verasper variegatus)鰓細胞繫,本文採用胰蛋白酶消化法啟動瞭圓斑星鰈鰓組織的體外培養,併通過對培養液配方和培養條件的優化成功地進行瞭圓斑星鰈鰓細胞的原代培養和繼代培養.結果顯示,圓斑星鰈鰓細胞的最適培養液為含有20%胎牛血清(FBS)的DMEM/F-12培養液,培養液最適pH值為7.2,最適培養溫度為22℃;通過嚮20%FBS-DMEM/F-12培養液(pH=7.2)中添加N-乙酰葡萄糖鹽痠鹽、羧甲基殼寡糖、堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)及Ⅰ型胰島素樣生長因子(IGF-I),在22℃成功啟動瞭圓斑星鰈鰓細胞的原代培養,細胞的貼壁、生長和分裂狀態良好,為典型的成纖維樣細胞形態,30 d即可形成彙閤的細胞單層;經連續繼代培養後,已成功建立瞭連續性圓斑星鰈鰓細胞繫,現已繼代培養至第76代;該細胞繫細胞經液氮凍存複囌後仍保持其原有的成纖維樣細胞形態,其貼壁生長狀態和增殖速度也與凍存前無差異;生長特性鑒定結果顯示,第60代圓斑星鰈鰓細胞繫細胞的群體倍增時間為43.6 h,錶明細胞的生長分裂依然十分旺盛.染色體分析結果顯示,圓斑星鰈鰓細胞繫細胞雖然齣現瞭染色體的非整倍性,但其特徵性染色體數目仍為46條,併具有其典型的二倍體覈型特徵(46 t),錶明所建立的細胞繫確為圓斑星鰈鰓細胞繫.該細胞繫的建立對于病毒與宿主相互作用機理的研究及病毒疫苗的開髮具有重要的理論和應用價值.
위건립원반성접(Verasper variegatus)새세포계,본문채용이단백매소화법계동료원반성접새조직적체외배양,병통과대배양액배방화배양조건적우화성공지진행료원반성접새세포적원대배양화계대배양.결과현시,원반성접새세포적최괄배양액위함유20%태우혈청(FBS)적DMEM/F-12배양액,배양액최괄pH치위7.2,최괄배양온도위22℃;통과향20%FBS-DMEM/F-12배양액(pH=7.2)중첨가N-을선포도당염산염、최갑기각과당、감성성섬유세포생장인자(bFGF)급Ⅰ형이도소양생장인자(IGF-I),재22℃성공계동료원반성접새세포적원대배양,세포적첩벽、생장화분렬상태량호,위전형적성섬유양세포형태,30 d즉가형성회합적세포단층;경련속계대배양후,이성공건립료련속성원반성접새세포계,현이계대배양지제76대;해세포계세포경액담동존복소후잉보지기원유적성섬유양세포형태,기첩벽생장상태화증식속도야여동존전무차이;생장특성감정결과현시,제60대원반성접새세포계세포적군체배증시간위43.6 h,표명세포적생장분렬의연십분왕성.염색체분석결과현시,원반성접새세포계세포수연출현료염색체적비정배성,단기특정성염색체수목잉위46조,병구유기전형적이배체핵형특정(46 t),표명소건립적세포계학위원반성접새세포계.해세포계적건립대우병독여숙주상호작용궤리적연구급병독역묘적개발구유중요적이론화응용개치.
