天津医药
天津醫藥
천진의약
TIANJIN MEDICAL JOURNAL
2011年
6期
493-495,后插2
,共4页
胡占东%公倩%朱铁虹%畅继武
鬍佔東%公倩%硃鐵虹%暢繼武
호점동%공천%주철홍%창계무
淋巴细胞%细菌噬菌体%遗传工程%免疫球蛋白Fab片段%白细胞介素4%逆转录聚合酶链反应
淋巴細胞%細菌噬菌體%遺傳工程%免疫毬蛋白Fab片段%白細胞介素4%逆轉錄聚閤酶鏈反應
림파세포%세균서균체%유전공정%면역구단백Fab편단%백세포개소4%역전록취합매련반응
目的:构建大容量人源Fab段噬菌体抗体库,从中筛选抗白细胞介素(IL)-4的抗体元件,为人源抗体的制备建立平台.方法:采集18例健康成人外周血,分离淋巴细胞,从中提取总RNA,用逆转录聚合酶链反应(HT-FCR)法扩增Fab段抗体基因,插入噬菌粒pComb3XSS载体内,构建噬菌体抗体元件库,用内切酶鉴定基因片段的插入.以抗原IL-4对抗体库进行富集筛选.筛选后,随机抽取菌株通过噬菌体-酶联免疫吸附法(Phage-ELISA)进行检测,并且对阳性克隆DNA的序列进行测定.结果:构建的人源Fab段噬菌体抗体库库容为2.4×108,酶切鉴定插入基因片段大小正确,从中筛选到与IL-4有结合活性的克隆.ELISA特异鉴定阳性,测序结果证实为人免疫球蛋白可变区基因片段.结论:成功构建了大容量人源化噬菌体抗体元件库,并初步获得人源性抗IL-4-Fab抗体,为大规模制备人源IL-4抗体和检测血中IL-4水平奠定了基础.
目的:構建大容量人源Fab段噬菌體抗體庫,從中篩選抗白細胞介素(IL)-4的抗體元件,為人源抗體的製備建立平檯.方法:採集18例健康成人外週血,分離淋巴細胞,從中提取總RNA,用逆轉錄聚閤酶鏈反應(HT-FCR)法擴增Fab段抗體基因,插入噬菌粒pComb3XSS載體內,構建噬菌體抗體元件庫,用內切酶鑒定基因片段的插入.以抗原IL-4對抗體庫進行富集篩選.篩選後,隨機抽取菌株通過噬菌體-酶聯免疫吸附法(Phage-ELISA)進行檢測,併且對暘性剋隆DNA的序列進行測定.結果:構建的人源Fab段噬菌體抗體庫庫容為2.4×108,酶切鑒定插入基因片段大小正確,從中篩選到與IL-4有結閤活性的剋隆.ELISA特異鑒定暘性,測序結果證實為人免疫毬蛋白可變區基因片段.結論:成功構建瞭大容量人源化噬菌體抗體元件庫,併初步穫得人源性抗IL-4-Fab抗體,為大規模製備人源IL-4抗體和檢測血中IL-4水平奠定瞭基礎.
목적:구건대용량인원Fab단서균체항체고,종중사선항백세포개소(IL)-4적항체원건,위인원항체적제비건립평태.방법:채집18례건강성인외주혈,분리림파세포,종중제취총RNA,용역전록취합매련반응(HT-FCR)법확증Fab단항체기인,삽입서균립pComb3XSS재체내,구건서균체항체원건고,용내절매감정기인편단적삽입.이항원IL-4대항체고진행부집사선.사선후,수궤추취균주통과서균체-매련면역흡부법(Phage-ELISA)진행검측,병차대양성극륭DNA적서렬진행측정.결과:구건적인원Fab단서균체항체고고용위2.4×108,매절감정삽입기인편단대소정학,종중사선도여IL-4유결합활성적극륭.ELISA특이감정양성,측서결과증실위인면역구단백가변구기인편단.결론:성공구건료대용량인원화서균체항체원건고,병초보획득인원성항IL-4-Fab항체,위대규모제비인원IL-4항체화검측혈중IL-4수평전정료기출.
