中国临床康复
中國臨床康複
중국림상강복
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATION
2005年
15期
117-119
,共3页
张际绯%金连弘%傅松滨%史忠诚%于旸
張際緋%金連弘%傅鬆濱%史忠誠%于旸
장제비%금련홍%부송빈%사충성%우양
逆转录聚合酶链反应%异构现象%质粒
逆轉錄聚閤酶鏈反應%異構現象%質粒
역전록취합매련반응%이구현상%질립
目的:Schwann细胞具有促进神经元再生的作用,Neuregulin1(NRG1)具有促进神经元再生和Schwann细胞增殖的效应,构建NRG1克隆载体,可为下一步建立NRG1转染的Schwann细胞系,对神经损伤模型进行Schwann细胞移植,观察其对神经损伤的修复作用提供重要实验方法.方法:实验于2003-09/2004-01在哈尔滨医科大学医学遗传学研究室完成.提取幼龄大鼠脑RNA,反转录聚合酶链反应,用XbaI和EcoRI对目的基因和载体质粒进行双酶切,T4连接酶连接Schwann后转化Top10感受态大肠杆菌,挑取LB(Amp+)平板生长克隆菌摇菌扩增,用菌液扩增聚合酶链反应检测目的基因,同时提取质粒与空载体并列电泳验证克隆质粒,进行克隆载体测序.结果:获得一株NRG1克隆质粒,测序结果显示为NRG1新的异构体,用基因组DNA和cDNA为模板扩增聚合酶链反应验证是NRG1新的剪切体.结论:构建的NRG1克隆异构体是大鼠NRG1基因克隆载体,可用于进一步的细胞转染、蛋白表达功能检测和细胞移植研究.
目的:Schwann細胞具有促進神經元再生的作用,Neuregulin1(NRG1)具有促進神經元再生和Schwann細胞增殖的效應,構建NRG1剋隆載體,可為下一步建立NRG1轉染的Schwann細胞繫,對神經損傷模型進行Schwann細胞移植,觀察其對神經損傷的脩複作用提供重要實驗方法.方法:實驗于2003-09/2004-01在哈爾濱醫科大學醫學遺傳學研究室完成.提取幼齡大鼠腦RNA,反轉錄聚閤酶鏈反應,用XbaI和EcoRI對目的基因和載體質粒進行雙酶切,T4連接酶連接Schwann後轉化Top10感受態大腸桿菌,挑取LB(Amp+)平闆生長剋隆菌搖菌擴增,用菌液擴增聚閤酶鏈反應檢測目的基因,同時提取質粒與空載體併列電泳驗證剋隆質粒,進行剋隆載體測序.結果:穫得一株NRG1剋隆質粒,測序結果顯示為NRG1新的異構體,用基因組DNA和cDNA為模闆擴增聚閤酶鏈反應驗證是NRG1新的剪切體.結論:構建的NRG1剋隆異構體是大鼠NRG1基因剋隆載體,可用于進一步的細胞轉染、蛋白錶達功能檢測和細胞移植研究.
목적:Schwann세포구유촉진신경원재생적작용,Neuregulin1(NRG1)구유촉진신경원재생화Schwann세포증식적효응,구건NRG1극륭재체,가위하일보건립NRG1전염적Schwann세포계,대신경손상모형진행Schwann세포이식,관찰기대신경손상적수복작용제공중요실험방법.방법:실험우2003-09/2004-01재합이빈의과대학의학유전학연구실완성.제취유령대서뇌RNA,반전록취합매련반응,용XbaI화EcoRI대목적기인화재체질립진행쌍매절,T4련접매련접Schwann후전화Top10감수태대장간균,도취LB(Amp+)평판생장극륭균요균확증,용균액확증취합매련반응검측목적기인,동시제취질립여공재체병렬전영험증극륭질립,진행극륭재체측서.결과:획득일주NRG1극륭질립,측서결과현시위NRG1신적이구체,용기인조DNA화cDNA위모판확증취합매련반응험증시NRG1신적전절체.결론:구건적NRG1극륭이구체시대서NRG1기인극륭재체,가용우진일보적세포전염、단백표체공능검측화세포이식연구.
