郑州大学学报（医学版）
鄭州大學學報（醫學版）
정주대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHENGZHOU UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2006年
3期
429-432
,共4页
李慎柯%贾岩龙%刘红涛%李杰%鲁照明%王建民%薛乐勋
李慎柯%賈巖龍%劉紅濤%李傑%魯照明%王建民%薛樂勛
리신가%가암룡%류홍도%리걸%로조명%왕건민%설악훈
杜氏盐藻%硝酸盐还原酶%突变株
杜氏鹽藻%硝痠鹽還原酶%突變株
두씨염조%초산염환원매%돌변주
目的:制备杜氏盐藻氯酸盐抗性突变株库并从中筛选出硝酸盐还原酶(NR)缺陷型突变株,测定其NRcDNA全长序列,分析其突变位点.方法:①用乙基亚硝基脲(ENU)对杜氏盐藻进行诱变,得到突变株库.然后用氯酸盐抗性筛选方法获得氯酸盐抗性藻株,经复筛和不同氮源生长试验,获得了氯酸盐抗性突变株库.再用96孔板法进行单藻培养,获得氯酸盐抗性突变株单藻群.用磺胺比色法测定各个单藻群的NR活性,挑选出NR活性完全丧失的突变株.然后用氯酸盐抗性实验和不同氮源生长实验验证其NR突变的稳定性.②根据已知的盐藻NR全长序列,设计3对PCR引物,提取突变株盐藻细胞mRNA,反转录成cDNA,分3段扩增其NR cDNA的全长序列,产物与T载体连接后转化至大肠杆菌JM109中,经筛选后测序,测序结果与野生型盐藻NR eDNA序列比较,分析其突变位点.结果:序列分析表明,3株突变株共有11处相同的突变,其中的3处点突变引起了氨基酸性质的改变.它们均在近3'端有一段相同的移码突变,造成19个氨基酸的完全改变.此外,2株还分别由于在1 235和1 639的位点突变而产生了一个终止密码子.结论:筛选出了3株杜氏盐藻NR完全缺陷型突变株.
目的:製備杜氏鹽藻氯痠鹽抗性突變株庫併從中篩選齣硝痠鹽還原酶(NR)缺陷型突變株,測定其NRcDNA全長序列,分析其突變位點.方法:①用乙基亞硝基脲(ENU)對杜氏鹽藻進行誘變,得到突變株庫.然後用氯痠鹽抗性篩選方法穫得氯痠鹽抗性藻株,經複篩和不同氮源生長試驗,穫得瞭氯痠鹽抗性突變株庫.再用96孔闆法進行單藻培養,穫得氯痠鹽抗性突變株單藻群.用磺胺比色法測定各箇單藻群的NR活性,挑選齣NR活性完全喪失的突變株.然後用氯痠鹽抗性實驗和不同氮源生長實驗驗證其NR突變的穩定性.②根據已知的鹽藻NR全長序列,設計3對PCR引物,提取突變株鹽藻細胞mRNA,反轉錄成cDNA,分3段擴增其NR cDNA的全長序列,產物與T載體連接後轉化至大腸桿菌JM109中,經篩選後測序,測序結果與野生型鹽藻NR eDNA序列比較,分析其突變位點.結果:序列分析錶明,3株突變株共有11處相同的突變,其中的3處點突變引起瞭氨基痠性質的改變.它們均在近3'耑有一段相同的移碼突變,造成19箇氨基痠的完全改變.此外,2株還分彆由于在1 235和1 639的位點突變而產生瞭一箇終止密碼子.結論:篩選齣瞭3株杜氏鹽藻NR完全缺陷型突變株.
목적:제비두씨염조록산염항성돌변주고병종중사선출초산염환원매(NR)결함형돌변주,측정기NRcDNA전장서렬,분석기돌변위점.방법:①용을기아초기뇨(ENU)대두씨염조진행유변,득도돌변주고.연후용록산염항성사선방법획득록산염항성조주,경복사화불동담원생장시험,획득료록산염항성돌변주고.재용96공판법진행단조배양,획득록산염항성돌변주단조군.용광알비색법측정각개단조군적NR활성,도선출NR활성완전상실적돌변주.연후용록산염항성실험화불동담원생장실험험증기NR돌변적은정성.②근거이지적염조NR전장서렬,설계3대PCR인물,제취돌변주염조세포mRNA,반전록성cDNA,분3단확증기NR cDNA적전장서렬,산물여T재체련접후전화지대장간균JM109중,경사선후측서,측서결과여야생형염조NR eDNA서렬비교,분석기돌변위점.결과:서렬분석표명,3주돌변주공유11처상동적돌변,기중적3처점돌변인기료안기산성질적개변.타문균재근3'단유일단상동적이마돌변,조성19개안기산적완전개변.차외,2주환분별유우재1 235화1 639적위점돌변이산생료일개종지밀마자.결론:사선출료3주두씨염조NR완전결함형돌변주.
