第三军医大学学报
第三軍醫大學學報
제삼군의대학학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE
2007年
12期
1145-1147
,共3页
褚志刚%张家平%张琼%向飞%宋华培%黄跃生
褚誌剛%張傢平%張瓊%嚮飛%宋華培%黃躍生
저지강%장가평%장경%향비%송화배%황약생
腺病毒载体%l-Caldesmon%ECV304细胞
腺病毒載體%l-Caldesmon%ECV304細胞
선병독재체%l-Caldesmon%ECV304세포
目的 构建含有l-Caldesmon基因的重组腺病毒表达载体.方法 以含有l-Caldesmon全长编码序列的pCGN-CaD为模板,PCR扩增l-Caldesmon, T-A克隆,酶切亚克隆到穿梭质粒pAdtrack-CMV上,在BJ5183菌内和pAdeasy同源重组,筛选阳性克隆,酶切鉴定,线性化后脂质体法转染HEK293细胞进行包装、扩增,得到含有l-Caldesmon基因的重组腺病毒,根据报告基因GFP测定病毒滴度.将收集的病毒液感染ECV304细胞,Western blot检测l-Caldesmon蛋白的表达.结果 成功构建了含有l-Caldesmon基因的重组腺病毒载体,病毒滴度可达1×10 9U /ml.重组病毒感染后可使ECV304细胞l-Caldesmon表达较对照组增加5倍.结论 该重组腺病毒载体的构建为研究l-Caldesmon蛋白在内皮细胞中的生物学功能提供了一定的工作基础.
目的 構建含有l-Caldesmon基因的重組腺病毒錶達載體.方法 以含有l-Caldesmon全長編碼序列的pCGN-CaD為模闆,PCR擴增l-Caldesmon, T-A剋隆,酶切亞剋隆到穿梭質粒pAdtrack-CMV上,在BJ5183菌內和pAdeasy同源重組,篩選暘性剋隆,酶切鑒定,線性化後脂質體法轉染HEK293細胞進行包裝、擴增,得到含有l-Caldesmon基因的重組腺病毒,根據報告基因GFP測定病毒滴度.將收集的病毒液感染ECV304細胞,Western blot檢測l-Caldesmon蛋白的錶達.結果 成功構建瞭含有l-Caldesmon基因的重組腺病毒載體,病毒滴度可達1×10 9U /ml.重組病毒感染後可使ECV304細胞l-Caldesmon錶達較對照組增加5倍.結論 該重組腺病毒載體的構建為研究l-Caldesmon蛋白在內皮細胞中的生物學功能提供瞭一定的工作基礎.
목적 구건함유l-Caldesmon기인적중조선병독표체재체.방법 이함유l-Caldesmon전장편마서렬적pCGN-CaD위모판,PCR확증l-Caldesmon, T-A극륭,매절아극륭도천사질립pAdtrack-CMV상,재BJ5183균내화pAdeasy동원중조,사선양성극륭,매절감정,선성화후지질체법전염HEK293세포진행포장、확증,득도함유l-Caldesmon기인적중조선병독,근거보고기인GFP측정병독적도.장수집적병독액감염ECV304세포,Western blot검측l-Caldesmon단백적표체.결과 성공구건료함유l-Caldesmon기인적중조선병독재체,병독적도가체1×10 9U /ml.중조병독감염후가사ECV304세포l-Caldesmon표체교대조조증가5배.결론 해중조선병독재체적구건위연구l-Caldesmon단백재내피세포중적생물학공능제공료일정적공작기출.
