人源中和性抗高致病性禽流感病毒H5N1基因工程全抗体的研制
인원중화성항고치병성금류감병독H5N1기인공정전항체적연제
Generation of Neutralizing Recombinant Human Antibodies for Targeting Highly Pathogenic Avian Influenza A(H5N1) Virus
  • 万方数据
    病毒学报 병독학보
    CHINESE JOURNAL OF VIROLOGY
    2008年 3期 165-171 ,共7页

    孙丽娜%刘琴芝%王敏%李川%李梓%胡晓芬%朱莉莉%李群%王世文%舒跃龙%梁米芳%李德新

    손려나%류금지%왕민%리천%리재%호효분%주리리%리군%왕세문%서약룡%량미방%리덕신

    禽流感病毒%噬菌体表面呈现%基因工程抗体%Fab抗体 禽流感病毒%噬菌體錶麵呈現%基因工程抗體%Fab抗體
    금류감병독%서균체표면정현%기인공정항체%Fab항체
    运用噬菌体表面呈现技术,从禽流感病人恢复期血中获得淋巴细胞,通过基因工程手段,构建了人源抗H5NI禽流感病毒基因工程抗体文库.用纯化的人源H5N1禽流感病毒颗粒(A/Anhui/1/2005)及重组血凝素蛋白HA(A/Viet Nam/1203/2004)对Fab噬菌体抗体库进行富集筛选,成功地获得了抗禽流感病毒H5N1血凝素蛋白HA的人源单抗Fab段基因,并在大肠杆菌中获得有效表达.通过序列测定确定抗体轻重链型别,然后将阳性克隆的轻链和重链Fd段基因分别克隆入全抗体表达载体pAC-L-Fc后转染昆虫Sf9细胞,利用杆状病毒/昆虫细胞系统实现全抗体的分泌型表达.用ELISA、IFA和流式细胞术对所获人源单抗的功能特性进行鉴定.结果表明,我们获得了2株特异性针对H5N1禽流感病毒血凝素蛋白HA而与甲1型和甲3型人流感病毒无交叉反应的人源单抗(AVFlulgG01、AVFlulgG03).微量中和试验结果表明,除A/Guangdong/1/2006外,AVFlu-IgG01能够广泛地中和HA基因进化上属于Clade 2的中国南方、北方及中部地区的H5N1禽流感病毒分离株,同时还对属于Clade Ⅰ的越南H5N1分离株A/Viet Nam/1203/2004具有中和活性;AVFluIgG03虽然不能中和A/Viet Nam/1203/2004,但是对属于Clade 2的所有中国H5N1分离株均具有中和作用.人源中和性抗禽流感病毒H5N1基因工程全抗体的获得不仅为高致病性禽流感病毒H5N1的预防和治疗带来了希望,同时也为其疫苗研制提供了新的思路.
    운용서균체표면정현기술,종금류감병인회복기혈중획득림파세포,통과기인공정수단,구건료인원항H5NI금류감병독기인공정항체문고.용순화적인원H5N1금류감병독과립(A/Anhui/1/2005)급중조혈응소단백HA(A/Viet Nam/1203/2004)대Fab서균체항체고진행부집사선,성공지획득료항금류감병독H5N1혈응소단백HA적인원단항Fab단기인,병재대장간균중획득유효표체.통과서렬측정학정항체경중련형별,연후장양성극륭적경련화중련Fd단기인분별극륭입전항체표체재체pAC-L-Fc후전염곤충Sf9세포,이용간상병독/곤충세포계통실현전항체적분비형표체.용ELISA、IFA화류식세포술대소획인원단항적공능특성진행감정.결과표명,아문획득료2주특이성침대H5N1금류감병독혈응소단백HA이여갑1형화갑3형인류감병독무교차반응적인원단항(AVFlulgG01、AVFlulgG03).미량중화시험결과표명,제A/Guangdong/1/2006외,AVFlu-IgG01능구엄범지중화HA기인진화상속우Clade 2적중국남방、북방급중부지구적H5N1금류감병독분리주,동시환대속우Clade Ⅰ적월남H5N1분리주A/Viet Nam/1203/2004구유중화활성;AVFluIgG03수연불능중화A/Viet Nam/1203/2004,단시대속우Clade 2적소유중국H5N1분리주균구유중화작용.인원중화성항금류감병독H5N1기인공정전항체적획득불부위고치병성금류감병독H5N1적예방화치료대래료희망,동시야위기역묘연제제공료신적사로.
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