南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2010年
7期
1526-1529
,共4页
张婷%赵迎泽%罗进勇%卢晓娟%文巍%冯涛
張婷%趙迎澤%囉進勇%盧曉娟%文巍%馮濤
장정%조영택%라진용%로효연%문외%풍도
HBx%LO2%逆转录病毒%肝癌
HBx%LO2%逆轉錄病毒%肝癌
HBx%LO2%역전록병독%간암
目的 构建乙型肝炎病毒X基因(HBX)逆转录病毒载体,并使其在人正常肝细胞LO2内的进行稳定表达.方法 PCR扩增HBX基因,克隆到逆转录病毒载体质粒pSEB-Flag中,构建表达HBX的重组逆转录病毒载体质粒pSEB-Flag-HBX,通过通过PCR、酶切、测序验证HBX基因后;体外将重组质粒pSEB-Flag-HBX与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装获得携带HBX基因的重组逆转录病毒,并感染靶细胞人正常肝细胞LO2,稻瘟菌素(Blasticidin)筛选,获得成功转入HBX的LO2细胞.通过RT-PCR和Western blot进一步验证HBX基因及HBx蛋白在LO2细胞内的表达.结果 (1)成功获得携带HBX基因的阳性重组质粒pSEB-Flag-HBX;(2)HBX基因被逆转录病毒成功地导入靶细胞LO2细胞,并实现稳定表达,RT-PCR检测到HBX mRNA在靶细胞中的表达,Western blot检测到HBx蛋白在靶细胞LO2-HBx细胞中的表达.结论 成功构建了携带HBX基因的重组逆转录病毒载体,感染人正常肝细胞LO2后能够稳定表达HBx蛋白,为进一步探讨HBx在肝癌发生发展中的作用提供了较为理想的实验模型.
目的 構建乙型肝炎病毒X基因(HBX)逆轉錄病毒載體,併使其在人正常肝細胞LO2內的進行穩定錶達.方法 PCR擴增HBX基因,剋隆到逆轉錄病毒載體質粒pSEB-Flag中,構建錶達HBX的重組逆轉錄病毒載體質粒pSEB-Flag-HBX,通過通過PCR、酶切、測序驗證HBX基因後;體外將重組質粒pSEB-Flag-HBX與包裝質粒pAmpho共同轉染人胚胎腎上皮細胞繫293T細胞,包裝穫得攜帶HBX基因的重組逆轉錄病毒,併感染靶細胞人正常肝細胞LO2,稻瘟菌素(Blasticidin)篩選,穫得成功轉入HBX的LO2細胞.通過RT-PCR和Western blot進一步驗證HBX基因及HBx蛋白在LO2細胞內的錶達.結果 (1)成功穫得攜帶HBX基因的暘性重組質粒pSEB-Flag-HBX;(2)HBX基因被逆轉錄病毒成功地導入靶細胞LO2細胞,併實現穩定錶達,RT-PCR檢測到HBX mRNA在靶細胞中的錶達,Western blot檢測到HBx蛋白在靶細胞LO2-HBx細胞中的錶達.結論 成功構建瞭攜帶HBX基因的重組逆轉錄病毒載體,感染人正常肝細胞LO2後能夠穩定錶達HBx蛋白,為進一步探討HBx在肝癌髮生髮展中的作用提供瞭較為理想的實驗模型.
목적 구건을형간염병독X기인(HBX)역전록병독재체,병사기재인정상간세포LO2내적진행은정표체.방법 PCR확증HBX기인,극륭도역전록병독재체질립pSEB-Flag중,구건표체HBX적중조역전록병독재체질립pSEB-Flag-HBX,통과통과PCR、매절、측서험증HBX기인후;체외장중조질립pSEB-Flag-HBX여포장질립pAmpho공동전염인배태신상피세포계293T세포,포장획득휴대HBX기인적중조역전록병독,병감염파세포인정상간세포LO2,도온균소(Blasticidin)사선,획득성공전입HBX적LO2세포.통과RT-PCR화Western blot진일보험증HBX기인급HBx단백재LO2세포내적표체.결과 (1)성공획득휴대HBX기인적양성중조질립pSEB-Flag-HBX;(2)HBX기인피역전록병독성공지도입파세포LO2세포,병실현은정표체,RT-PCR검측도HBX mRNA재파세포중적표체,Western blot검측도HBx단백재파세포LO2-HBx세포중적표체.결론 성공구건료휴대HBX기인적중조역전록병독재체,감염인정상간세포LO2후능구은정표체HBx단백,위진일보탐토HBx재간암발생발전중적작용제공료교위이상적실험모형.
