中国普外基础与临床杂志
中國普外基礎與臨床雜誌
중국보외기출여림상잡지
CHINESE JOURNAL OF BASES AND CLINICS IN GENERAL SURGERY
2011年
10期
1043-1048
,共6页
刘程伟%张雪松%王石%田浩%程明勋%王树卿%胡新华%张强%辛世杰%段志泉
劉程偉%張雪鬆%王石%田浩%程明勛%王樹卿%鬍新華%張彊%辛世傑%段誌泉
류정위%장설송%왕석%전호%정명훈%왕수경%호신화%장강%신세걸%단지천
DNA酶%移植静脉%内膜增生
DNA酶%移植靜脈%內膜增生
DNA매%이식정맥%내막증생
目的 探讨早期生长反应基因-1 (Egr-1) DNA酶(Egr-1 DNA enzyme,EDRz)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和内膜增生的抑制作用,从而证实基因治疗静脉移植后狭窄、闭塞的可行性.方法 构建EDRz,建立自体静脉移植模型,将大鼠右颈总静脉端-端吻合于肾下腹主动脉,EDRz转染移植静脉,分别于移植后1、2、6、24 h及3、7、14、28、42 d切取移植静脉标本,每个时相按随机数字表法随机抽取10只大鼠.荧光显微镜下观察EDRz转染移植静脉情况;应用原位杂交和RT-PCR方法检测Egr-1 mRNA的表达；应用Western蛋白印迹和免疫组织化学方法检测Egr-1蛋白表达情况；HE染色光镜下观察组织学形态.结果 ①EDRz转染移植静脉情况:移植后1h时,EDRz主要位于移植静脉的外膜、中膜和部分内皮细胞;2、6及24 h时,EDRz则主要位于移植静脉的中膜；7d时,EDRz主要位于移植静脉的内膜; 14、28及42 d时未检测到EDRz的表达.②Egr-1 mRNA表达结果.RT-PCR检测结果:转染EDRz后1h时,Egr-1 mRNA表达出现高峰,2、6及24 h表达下降,3d时表达微弱,移植后7、14、28及42 d未见Egr-1 mRNA的表达,转染EDRz后1h时Egr-1 mRNA表达明显高于其余各时相(P＜0.01).原位杂交检测Egr-1 mRNA表达的变化趋势与RT-PCR结果基本一致.③Egr-1蛋白表达结果.Western蛋白印迹结果:正常静脉中未检测到Egr-1蛋白阳性表达.转染EDRz后2h时,出现Egr-1蛋白阳性表达,6h、24 h及3d时其表达逐渐降低,移植后1h时和移植后7、14、28及42 d时未见Egr-1蛋白阳性表达.移植后2h时的Egr-1蛋白表达的吸光度值高于其他时相(P＜0.01).免疫组织化学方法检测的Egr1蛋白阳性表达的变化趋势与Western蛋白印迹结果基本一致.④EDRz转染移植静脉与未转染同期相比VSMC的增殖程度和内膜厚度明显减轻.结论 EDRz通过减少Egr1在自体移植静脉中的表达,可有效地抑制自体移植静脉中VSMC增殖和内膜增生,可用来防治自体静脉移植后所导致的血管狭窄、闭塞.
目的 探討早期生長反應基因-1 (Egr-1) DNA酶(Egr-1 DNA enzyme,EDRz)對血管平滑肌細胞(VSMC)增殖和內膜增生的抑製作用,從而證實基因治療靜脈移植後狹窄、閉塞的可行性.方法 構建EDRz,建立自體靜脈移植模型,將大鼠右頸總靜脈耑-耑吻閤于腎下腹主動脈,EDRz轉染移植靜脈,分彆于移植後1、2、6、24 h及3、7、14、28、42 d切取移植靜脈標本,每箇時相按隨機數字錶法隨機抽取10隻大鼠.熒光顯微鏡下觀察EDRz轉染移植靜脈情況;應用原位雜交和RT-PCR方法檢測Egr-1 mRNA的錶達；應用Western蛋白印跡和免疫組織化學方法檢測Egr-1蛋白錶達情況；HE染色光鏡下觀察組織學形態.結果 ①EDRz轉染移植靜脈情況:移植後1h時,EDRz主要位于移植靜脈的外膜、中膜和部分內皮細胞;2、6及24 h時,EDRz則主要位于移植靜脈的中膜；7d時,EDRz主要位于移植靜脈的內膜; 14、28及42 d時未檢測到EDRz的錶達.②Egr-1 mRNA錶達結果.RT-PCR檢測結果:轉染EDRz後1h時,Egr-1 mRNA錶達齣現高峰,2、6及24 h錶達下降,3d時錶達微弱,移植後7、14、28及42 d未見Egr-1 mRNA的錶達,轉染EDRz後1h時Egr-1 mRNA錶達明顯高于其餘各時相(P＜0.01).原位雜交檢測Egr-1 mRNA錶達的變化趨勢與RT-PCR結果基本一緻.③Egr-1蛋白錶達結果.Western蛋白印跡結果:正常靜脈中未檢測到Egr-1蛋白暘性錶達.轉染EDRz後2h時,齣現Egr-1蛋白暘性錶達,6h、24 h及3d時其錶達逐漸降低,移植後1h時和移植後7、14、28及42 d時未見Egr-1蛋白暘性錶達.移植後2h時的Egr-1蛋白錶達的吸光度值高于其他時相(P＜0.01).免疫組織化學方法檢測的Egr1蛋白暘性錶達的變化趨勢與Western蛋白印跡結果基本一緻.④EDRz轉染移植靜脈與未轉染同期相比VSMC的增殖程度和內膜厚度明顯減輕.結論 EDRz通過減少Egr1在自體移植靜脈中的錶達,可有效地抑製自體移植靜脈中VSMC增殖和內膜增生,可用來防治自體靜脈移植後所導緻的血管狹窄、閉塞.
목적 탐토조기생장반응기인-1 (Egr-1) DNA매(Egr-1 DNA enzyme,EDRz)대혈관평활기세포(VSMC)증식화내막증생적억제작용,종이증실기인치료정맥이식후협착、폐새적가행성.방법 구건EDRz,건립자체정맥이식모형,장대서우경총정맥단-단문합우신하복주동맥,EDRz전염이식정맥,분별우이식후1、2、6、24 h급3、7、14、28、42 d절취이식정맥표본,매개시상안수궤수자표법수궤추취10지대서.형광현미경하관찰EDRz전염이식정맥정황;응용원위잡교화RT-PCR방법검측Egr-1 mRNA적표체；응용Western단백인적화면역조직화학방법검측Egr-1단백표체정황；HE염색광경하관찰조직학형태.결과 ①EDRz전염이식정맥정황:이식후1h시,EDRz주요위우이식정맥적외막、중막화부분내피세포;2、6급24 h시,EDRz칙주요위우이식정맥적중막；7d시,EDRz주요위우이식정맥적내막; 14、28급42 d시미검측도EDRz적표체.②Egr-1 mRNA표체결과.RT-PCR검측결과:전염EDRz후1h시,Egr-1 mRNA표체출현고봉,2、6급24 h표체하강,3d시표체미약,이식후7、14、28급42 d미견Egr-1 mRNA적표체,전염EDRz후1h시Egr-1 mRNA표체명현고우기여각시상(P＜0.01).원위잡교검측Egr-1 mRNA표체적변화추세여RT-PCR결과기본일치.③Egr-1단백표체결과.Western단백인적결과:정상정맥중미검측도Egr-1단백양성표체.전염EDRz후2h시,출현Egr-1단백양성표체,6h、24 h급3d시기표체축점강저,이식후1h시화이식후7、14、28급42 d시미견Egr-1단백양성표체.이식후2h시적Egr-1단백표체적흡광도치고우기타시상(P＜0.01).면역조직화학방법검측적Egr1단백양성표체적변화추세여Western단백인적결과기본일치.④EDRz전염이식정맥여미전염동기상비VSMC적증식정도화내막후도명현감경.결론 EDRz통과감소Egr1재자체이식정맥중적표체,가유효지억제자체이식정맥중VSMC증식화내막증생,가용래방치자체정맥이식후소도치적혈관협착、폐새.
