江苏医药
江囌醫藥
강소의약
JIANGSU MEDICAL JOURNAL
2006年
5期
444-447
,共4页
王元元%胡锦%董万利%蒋觉安
王元元%鬍錦%董萬利%蔣覺安
왕원원%호금%동만리%장각안
RNA干扰%血管内皮生长因子%神经生长因子%重组质粒
RNA榦擾%血管內皮生長因子%神經生長因子%重組質粒
RNA간우%혈관내피생장인자%신경생장인자%중조질립
目的利用RNA干扰(RNAi)技术,构建靶向血管内皮生长因子(VEGF)、神经生长因子(NGF)双基因的短发夹RNA(short hairpin, shRNA)真核表达载体用于胶质瘤基因治疗.方法分别设计并体外合成靶向基因VEGF、NGF的特异性编码shRNA序列的寡核苷酸,克隆到经Bgl Ⅱ-HindⅢ酶切线性化的pSUPER质粒H1启动子下游,构建shRNA重组质粒,进而脂质体介导瞬时转染胶质瘤细胞系U251,半定量RT-PCR检测VEGF mRNA、NGF mRNA表达.结果重组质粒经过酶切鉴定和测序,插入片段的序列大小、位点和方向均与已合成的寡核苷酸的序列完全一致,在瞬时转染胶质瘤细胞后下调了VEGF mRNA、NGF mRNA的表达.结论成功构建靶向基因VEGF、NGF的shRNA真核表达载体,为进一步应用RNAi技术,研究其对胶质瘤的抑制作用奠定基础.
目的利用RNA榦擾(RNAi)技術,構建靶嚮血管內皮生長因子(VEGF)、神經生長因子(NGF)雙基因的短髮夾RNA(short hairpin, shRNA)真覈錶達載體用于膠質瘤基因治療.方法分彆設計併體外閤成靶嚮基因VEGF、NGF的特異性編碼shRNA序列的寡覈苷痠,剋隆到經Bgl Ⅱ-HindⅢ酶切線性化的pSUPER質粒H1啟動子下遊,構建shRNA重組質粒,進而脂質體介導瞬時轉染膠質瘤細胞繫U251,半定量RT-PCR檢測VEGF mRNA、NGF mRNA錶達.結果重組質粒經過酶切鑒定和測序,插入片段的序列大小、位點和方嚮均與已閤成的寡覈苷痠的序列完全一緻,在瞬時轉染膠質瘤細胞後下調瞭VEGF mRNA、NGF mRNA的錶達.結論成功構建靶嚮基因VEGF、NGF的shRNA真覈錶達載體,為進一步應用RNAi技術,研究其對膠質瘤的抑製作用奠定基礎.
목적이용RNA간우(RNAi)기술,구건파향혈관내피생장인자(VEGF)、신경생장인자(NGF)쌍기인적단발협RNA(short hairpin, shRNA)진핵표체재체용우효질류기인치료.방법분별설계병체외합성파향기인VEGF、NGF적특이성편마shRNA서렬적과핵감산,극륭도경Bgl Ⅱ-HindⅢ매절선성화적pSUPER질립H1계동자하유,구건shRNA중조질립,진이지질체개도순시전염효질류세포계U251,반정량RT-PCR검측VEGF mRNA、NGF mRNA표체.결과중조질립경과매절감정화측서,삽입편단적서렬대소、위점화방향균여이합성적과핵감산적서렬완전일치,재순시전염효질류세포후하조료VEGF mRNA、NGF mRNA적표체.결론성공구건파향기인VEGF、NGF적shRNA진핵표체재체,위진일보응용RNAi기술,연구기대효질류적억제작용전정기출.
