中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2006年
11期
1031-1034
,共4页
结核分枝杆菌%分泌蛋白%重组质粒构建%表达与鉴定
結覈分枝桿菌%分泌蛋白%重組質粒構建%錶達與鑒定
결핵분지간균%분비단백%중조질립구건%표체여감정
目的 对结核分枝杆菌的一种分泌蛋白MPT51的基因进行克隆,表达,纯化与鉴定,为核酸疫苗的研制与应用打下基础.方法 以结核杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,用PCR法对编码MPT51蛋白的抗原基因进行扩增,产物克隆到表达载体pET22b中,构建了含mpt51的重组质粒,将此重组质粒先转化到E.coli XLI-Blue内提取质粒,酶切及测序鉴定,再转化入E.coli BL21(DE3)PLysS菌株内,以IPTG进行诱导后,破菌,离心,包涵体经尿素变性溶解后用His·Bind亲和层析柱纯化,透析复性,纯化后蛋白进行SDS-PAGE,通过电转移将胶中蛋白转到硝酸纤维素薄膜上后进行特异性免疫检测.结果 电泳发现转化了重组质粒的菌株有蛋白表达,所表达的蛋白质相对分子质量为27 800,抗体检测有特异条带,大小为27.8kDa.结论 目的基因克隆到了表达载体内并证明表达,重组结核杆菌分泌蛋白MPT51的成功表达为核酸疫苗的研制与应用和免疫效应检测以及上述抗原、抗体的大规模制备打下基础.
目的 對結覈分枝桿菌的一種分泌蛋白MPT51的基因進行剋隆,錶達,純化與鑒定,為覈痠疫苗的研製與應用打下基礎.方法 以結覈桿菌H37Rv株基因組DNA為模闆,用PCR法對編碼MPT51蛋白的抗原基因進行擴增,產物剋隆到錶達載體pET22b中,構建瞭含mpt51的重組質粒,將此重組質粒先轉化到E.coli XLI-Blue內提取質粒,酶切及測序鑒定,再轉化入E.coli BL21(DE3)PLysS菌株內,以IPTG進行誘導後,破菌,離心,包涵體經尿素變性溶解後用His·Bind親和層析柱純化,透析複性,純化後蛋白進行SDS-PAGE,通過電轉移將膠中蛋白轉到硝痠纖維素薄膜上後進行特異性免疫檢測.結果 電泳髮現轉化瞭重組質粒的菌株有蛋白錶達,所錶達的蛋白質相對分子質量為27 800,抗體檢測有特異條帶,大小為27.8kDa.結論 目的基因剋隆到瞭錶達載體內併證明錶達,重組結覈桿菌分泌蛋白MPT51的成功錶達為覈痠疫苗的研製與應用和免疫效應檢測以及上述抗原、抗體的大規模製備打下基礎.
목적 대결핵분지간균적일충분비단백MPT51적기인진행극륭,표체,순화여감정,위핵산역묘적연제여응용타하기출.방법 이결핵간균H37Rv주기인조DNA위모판,용PCR법대편마MPT51단백적항원기인진행확증,산물극륭도표체재체pET22b중,구건료함mpt51적중조질립,장차중조질립선전화도E.coli XLI-Blue내제취질립,매절급측서감정,재전화입E.coli BL21(DE3)PLysS균주내,이IPTG진행유도후,파균,리심,포함체경뇨소변성용해후용His·Bind친화층석주순화,투석복성,순화후단백진행SDS-PAGE,통과전전이장효중단백전도초산섬유소박막상후진행특이성면역검측.결과 전영발현전화료중조질립적균주유단백표체,소표체적단백질상대분자질량위27 800,항체검측유특이조대,대소위27.8kDa.결론 목적기인극륭도료표체재체내병증명표체,중조결핵간균분비단백MPT51적성공표체위핵산역묘적연제여응용화면역효응검측이급상술항원、항체적대규모제비타하기출.
