中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2007年
20期
3904-3907
,共4页
目的:对慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞来源的髓样树突状细胞进行功能分析.方法:实验于2005-01/2006-07在泰山医学院完成.①髓样树突状细胞来源于2005-0712泰山医学院附属医院传染科收治的20例慢性乙型肝炎患者,男12例,女8例,年龄21-42岁,乙型肝炎病毒标志物均为HBsAg(+)、HbeAg(+)、HbcAb(+),乙型肝炎病毒DNA均为阳性,3个月内均未使用抗病毒药物和免疫调节剂.诊断参照2000年西安全国病毒性肝炎会议修订的临床诊断标准,排除甲型肝炎、丙裂肝炎、丁犁肝炎、戊型肝炎等病毒重叠感染及其他原因引起的肝脏损害.②以14例健康供血员的髓样树突状细胞作为正常对照,男8例.女6例,年龄21~36岁.③慢性乙型肝炎患者与健康供血员各取外周血20 mL,肝素抗凝,用淋巴细胞分离液分离去除红细胞和粒细胞,收集外周血单个核细胞.应用粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素4诱导培养其分化发育为髓样树突状细胞,锥虫篮染色检测细胞活力并进行细胞计数.④收集培养第10天的1×109L-1髓样树突状细胞,离心管中分别加入荧光标记抗体HLA-DR-FITC和CD86-FITC,终浓度为5mg/L,4℃标记45 min,用流式细胞仪检测细胞表面表型.⑤取培养第7天的1×109L-1髓样树突状细胞,加入含体积分数为1的胎牛血清、50μg/L粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、10μg/L白细胞介素4、1 U/L肿瘤坏死因子α的新鲜培养基继续培养,24 h后收集培养上清,ELISA法检测白细胞介素10与白细胞介素12的含星.⑥培养第10天的髓样树突状细胞以30Gy γ放射线灭活后,每孔分别按髓样树突状细胞:T细胞=1:40,1:20,1:10,1:5加入到已含有纯化T细胞的996孔板中,采用3H-TdR掺人法检测髓样树突状细胞刺激同种异体T细胞增殖反应的能力.结果:①髓样树突状细胞的形态学特征及生成量:慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞诱导培养10 d时,呈典型的髓样树突状细胞,低密度,圆形或不规则形,表面有丰富的伸长毛刺,悬浮不贴壁,与正常人群外周血单个核细胞诱导的髓样树突状细胞形态学无明显区别.锥虫篮染色结果显示两单髓样树突状细胞活力均大于95%.慢性乙型肝炎患者髓样树突状细胞数量明显低于正常人群[(3.4±0.3)×109L-1,(5.2±0,3)×108L-1=17.218 3,P<0.01].②髓样树突状细胞表型分析及细胞因子含量变化:与正常人群比较,慢性乙型肝炎患者髓样树突状细胞表面CD86和HLA-DR分子表达率均明显降低(t=5.435 1~8.706 2,P均<0,01);培养上清中白细胞介素12的含量明显降低(t=13.720 8,P<0.01),白细胞介素10的含量无明显变化.③混合淋巴细胞效应:在髓样树突状细胞:T细胞=1:5,1:10,1:20,1:40时,慢性乙型肝炎患者髓样树突状细胞激活T细胞增殖的能力明显低于正常人群(t=17.709 6~28.022 5,P均<0.01).结论:慢性乙型肝炎患者外周血中髓样树突状细胞数目减少、功能降低,可能是导致机体对慢性乙型肝炎病毒感染产生免疫耐受的原因之一.
目的:對慢性乙型肝炎患者外週血單箇覈細胞來源的髓樣樹突狀細胞進行功能分析.方法:實驗于2005-01/2006-07在泰山醫學院完成.①髓樣樹突狀細胞來源于2005-0712泰山醫學院附屬醫院傳染科收治的20例慢性乙型肝炎患者,男12例,女8例,年齡21-42歲,乙型肝炎病毒標誌物均為HBsAg(+)、HbeAg(+)、HbcAb(+),乙型肝炎病毒DNA均為暘性,3箇月內均未使用抗病毒藥物和免疫調節劑.診斷參照2000年西安全國病毒性肝炎會議脩訂的臨床診斷標準,排除甲型肝炎、丙裂肝炎、丁犛肝炎、戊型肝炎等病毒重疊感染及其他原因引起的肝髒損害.②以14例健康供血員的髓樣樹突狀細胞作為正常對照,男8例.女6例,年齡21~36歲.③慢性乙型肝炎患者與健康供血員各取外週血20 mL,肝素抗凝,用淋巴細胞分離液分離去除紅細胞和粒細胞,收集外週血單箇覈細胞.應用粒細胞一巨噬細胞集落刺激因子和白細胞介素4誘導培養其分化髮育為髓樣樹突狀細胞,錐蟲籃染色檢測細胞活力併進行細胞計數.④收集培養第10天的1×109L-1髓樣樹突狀細胞,離心管中分彆加入熒光標記抗體HLA-DR-FITC和CD86-FITC,終濃度為5mg/L,4℃標記45 min,用流式細胞儀檢測細胞錶麵錶型.⑤取培養第7天的1×109L-1髓樣樹突狀細胞,加入含體積分數為1的胎牛血清、50μg/L粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子、10μg/L白細胞介素4、1 U/L腫瘤壞死因子α的新鮮培養基繼續培養,24 h後收集培養上清,ELISA法檢測白細胞介素10與白細胞介素12的含星.⑥培養第10天的髓樣樹突狀細胞以30Gy γ放射線滅活後,每孔分彆按髓樣樹突狀細胞:T細胞=1:40,1:20,1:10,1:5加入到已含有純化T細胞的996孔闆中,採用3H-TdR摻人法檢測髓樣樹突狀細胞刺激同種異體T細胞增殖反應的能力.結果:①髓樣樹突狀細胞的形態學特徵及生成量:慢性乙型肝炎患者外週血單箇覈細胞誘導培養10 d時,呈典型的髓樣樹突狀細胞,低密度,圓形或不規則形,錶麵有豐富的伸長毛刺,懸浮不貼壁,與正常人群外週血單箇覈細胞誘導的髓樣樹突狀細胞形態學無明顯區彆.錐蟲籃染色結果顯示兩單髓樣樹突狀細胞活力均大于95%.慢性乙型肝炎患者髓樣樹突狀細胞數量明顯低于正常人群[(3.4±0.3)×109L-1,(5.2±0,3)×108L-1=17.218 3,P<0.01].②髓樣樹突狀細胞錶型分析及細胞因子含量變化:與正常人群比較,慢性乙型肝炎患者髓樣樹突狀細胞錶麵CD86和HLA-DR分子錶達率均明顯降低(t=5.435 1~8.706 2,P均<0,01);培養上清中白細胞介素12的含量明顯降低(t=13.720 8,P<0.01),白細胞介素10的含量無明顯變化.③混閤淋巴細胞效應:在髓樣樹突狀細胞:T細胞=1:5,1:10,1:20,1:40時,慢性乙型肝炎患者髓樣樹突狀細胞激活T細胞增殖的能力明顯低于正常人群(t=17.709 6~28.022 5,P均<0.01).結論:慢性乙型肝炎患者外週血中髓樣樹突狀細胞數目減少、功能降低,可能是導緻機體對慢性乙型肝炎病毒感染產生免疫耐受的原因之一.
목적:대만성을형간염환자외주혈단개핵세포래원적수양수돌상세포진행공능분석.방법:실험우2005-01/2006-07재태산의학원완성.①수양수돌상세포래원우2005-0712태산의학원부속의원전염과수치적20례만성을형간염환자,남12례,녀8례,년령21-42세,을형간염병독표지물균위HBsAg(+)、HbeAg(+)、HbcAb(+),을형간염병독DNA균위양성,3개월내균미사용항병독약물화면역조절제.진단삼조2000년서안전국병독성간염회의수정적림상진단표준,배제갑형간염、병렬간염、정리간염、무형간염등병독중첩감염급기타원인인기적간장손해.②이14례건강공혈원적수양수돌상세포작위정상대조,남8례.녀6례,년령21~36세.③만성을형간염환자여건강공혈원각취외주혈20 mL,간소항응,용림파세포분리액분리거제홍세포화립세포,수집외주혈단개핵세포.응용립세포일거서세포집락자격인자화백세포개소4유도배양기분화발육위수양수돌상세포,추충람염색검측세포활력병진행세포계수.④수집배양제10천적1×109L-1수양수돌상세포,리심관중분별가입형광표기항체HLA-DR-FITC화CD86-FITC,종농도위5mg/L,4℃표기45 min,용류식세포의검측세포표면표형.⑤취배양제7천적1×109L-1수양수돌상세포,가입함체적분수위1적태우혈청、50μg/L립세포-거서세포집락자격인자、10μg/L백세포개소4、1 U/L종류배사인자α적신선배양기계속배양,24 h후수집배양상청,ELISA법검측백세포개소10여백세포개소12적함성.⑥배양제10천적수양수돌상세포이30Gy γ방사선멸활후,매공분별안수양수돌상세포:T세포=1:40,1:20,1:10,1:5가입도이함유순화T세포적996공판중,채용3H-TdR참인법검측수양수돌상세포자격동충이체T세포증식반응적능력.결과:①수양수돌상세포적형태학특정급생성량:만성을형간염환자외주혈단개핵세포유도배양10 d시,정전형적수양수돌상세포,저밀도,원형혹불규칙형,표면유봉부적신장모자,현부불첩벽,여정상인군외주혈단개핵세포유도적수양수돌상세포형태학무명현구별.추충람염색결과현시량단수양수돌상세포활력균대우95%.만성을형간염환자수양수돌상세포수량명현저우정상인군[(3.4±0.3)×109L-1,(5.2±0,3)×108L-1=17.218 3,P<0.01].②수양수돌상세포표형분석급세포인자함량변화:여정상인군비교,만성을형간염환자수양수돌상세포표면CD86화HLA-DR분자표체솔균명현강저(t=5.435 1~8.706 2,P균<0,01);배양상청중백세포개소12적함량명현강저(t=13.720 8,P<0.01),백세포개소10적함량무명현변화.③혼합림파세포효응:재수양수돌상세포:T세포=1:5,1:10,1:20,1:40시,만성을형간염환자수양수돌상세포격활T세포증식적능력명현저우정상인군(t=17.709 6~28.022 5,P균<0.01).결론:만성을형간염환자외주혈중수양수돌상세포수목감소、공능강저,가능시도치궤체대만성을형간염병독감염산생면역내수적원인지일.