成都中医药大学学报
成都中醫藥大學學報
성도중의약대학학보
JOURNAL OF CHENGDU UNIVERSITY OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
2008年
2期
45-48
,共4页
郭丁丁%马逾英%唐琳%陈要臻
郭丁丁%馬逾英%唐琳%陳要臻
곽정정%마유영%당림%진요진
白芷%ISSR反应体系%建立和优化
白芷%ISSR反應體繫%建立和優化
백지%ISSR반응체계%건립화우화
目的:建立白芷的ISSR最佳反应体系及PCR扩增参数,为今后利用ISSR标记技术进行白芷鉴定及种质遗传多样性分析提供一个标准化程序.方法:以白芷基因组DNA为模板,分析了ISSR反应体系中模板DNA、Mg2+、dNTPs、引物浓度,TaqDNA聚合酶用量及退火温度对ISSR-PCR扩增的影响.结果:建立了重复性好,分辨率高的ISSR反应体系,即在25μL反应体系中,模板DNA浓度为10～30 ng,2.5μ10×PCR buffer(Mg2+free),MgCl2 2.0 mmol/L,dNTPs 0.2 mmol/L,Taq酶1.0U,引物0.6 pμmol/L;扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性30 s,引物在筛选后的最佳退火温度退火45 s,72℃延伸2min,共计39个循环,循环结束后在72℃延伸5 min.结论:建立了适用于白芷的ISSR反应体系.为今后利用ISSR标记技术开展白芷遗传变异分析和构建遗传图谱奠定了基础.
目的:建立白芷的ISSR最佳反應體繫及PCR擴增參數,為今後利用ISSR標記技術進行白芷鑒定及種質遺傳多樣性分析提供一箇標準化程序.方法:以白芷基因組DNA為模闆,分析瞭ISSR反應體繫中模闆DNA、Mg2+、dNTPs、引物濃度,TaqDNA聚閤酶用量及退火溫度對ISSR-PCR擴增的影響.結果:建立瞭重複性好,分辨率高的ISSR反應體繫,即在25μL反應體繫中,模闆DNA濃度為10～30 ng,2.5μ10×PCR buffer(Mg2+free),MgCl2 2.0 mmol/L,dNTPs 0.2 mmol/L,Taq酶1.0U,引物0.6 pμmol/L;擴增程序為:94℃預變性5 min;94℃變性30 s,引物在篩選後的最佳退火溫度退火45 s,72℃延伸2min,共計39箇循環,循環結束後在72℃延伸5 min.結論:建立瞭適用于白芷的ISSR反應體繫.為今後利用ISSR標記技術開展白芷遺傳變異分析和構建遺傳圖譜奠定瞭基礎.
목적:건립백지적ISSR최가반응체계급PCR확증삼수,위금후이용ISSR표기기술진행백지감정급충질유전다양성분석제공일개표준화정서.방법:이백지기인조DNA위모판,분석료ISSR반응체계중모판DNA、Mg2+、dNTPs、인물농도,TaqDNA취합매용량급퇴화온도대ISSR-PCR확증적영향.결과:건립료중복성호,분변솔고적ISSR반응체계,즉재25μL반응체계중,모판DNA농도위10～30 ng,2.5μ10×PCR buffer(Mg2+free),MgCl2 2.0 mmol/L,dNTPs 0.2 mmol/L,Taq매1.0U,인물0.6 pμmol/L;확증정서위:94℃예변성5 min;94℃변성30 s,인물재사선후적최가퇴화온도퇴화45 s,72℃연신2min,공계39개순배,순배결속후재72℃연신5 min.결론:건립료괄용우백지적ISSR반응체계.위금후이용ISSR표기기술개전백지유전변이분석화구건유전도보전정료기출.
