CAJ | 학술논문

研究自行构建的产β-葡聚糖酶的工程菌E.coli BL21(DE3)-pET28a(+)-bgl在LB培养基中的生长特性,考察种子液的菌龄、培养基起始pH、接种量及诱导起始时发酵液菌浓度等对β-葡聚糖酶产生水平的影响;通过正交试验确定诱导剂IPTG及乳糖添加量、诱导温度及诱导剂作用时间.结果表明:培养基起始pH 7.0,对数生长中期的种子液(OD600为0.35)以接种量(体积分数)10%接入摇瓶发酵培养,37 ℃,200 r/min培养约3 h,菌液OD值达到1.0左右,添加终浓度分别为0.033 6 mmol/L的IPTG及10 mmol/L乳糖,24℃诱导6 h,发酵液清液中酶活达到最高(336.33 U/mL),菌体生长量为1.12 g/L,发酵液中总酶活达到459.32 U/mL,是原始菌株在相同条件下所产酶活的6.62倍.采用优化培养条件及诱导剂作用条件,重组菌在TB培养基中酶活水平进一步提高,诱导剂作用10 h,发酵清液中酶活为1 090.31 U/mL,总酶活1 570.83 U/mL,是原始菌在该条件下酶活的19.73倍,显示出重组菌具有广阔的工业化应用前景.
연구자행구건적산β-포취당매적공정균E.coli BL21(DE3)-pET28a(+)-bgl재LB배양기중적생장특성,고찰충자액적균령、배양기기시pH、접충량급유도기시시발효액균농도등대β-포취당매산생수평적영향;통과정교시험학정유도제IPTG급유당첨가량、유도온도급유도제작용시간.결과표명:배양기기시pH 7.0,대수생장중기적충자액(OD600위0.35)이접충량(체적분수)10%접입요병발효배양,37 ℃,200 r/min배양약3 h,균액OD치체도1.0좌우,첨가종농도분별위0.033 6 mmol/L적IPTG급10 mmol/L유당,24℃유도6 h,발효액청액중매활체도최고(336.33 U/mL),균체생장량위1.12 g/L,발효액중총매활체도459.32 U/mL,시원시균주재상동조건하소산매활적6.62배.채용우화배양조건급유도제작용조건,중조균재TB배양기중매활수평진일보제고,유도제작용10 h,발효청액중매활위1 090.31 U/mL,총매활1 570.83 U/mL,시원시균재해조건하매활적19.73배,현시출중조균구유엄활적공업화응용전경.