遗传
遺傳
유전
HEREDITAS(BEIJING)
2009年
6期
595-599
,共5页
徐焕宇%龚秀丽%郭歆冰%马晴雯%曾溢滔
徐煥宇%龔秀麗%郭歆冰%馬晴雯%曾溢滔
서환우%공수려%곽흠빙%마청문%증일도
卵母细胞%卵透明带糖蛋白3%φC31整合酶%基因操作%位点特异性重组
卵母細胞%卵透明帶糖蛋白3%φC31整閤酶%基因操作%位點特異性重組
란모세포%란투명대당단백3%φC31정합매%기인조작%위점특이성중조
链霉菌噬菌体φC31整合酶是一种位点特异性重组酶(Site-specific recombinase,SSR),可介导链霉菌噬菌体attP位点(Phage attachment site)和链霉菌基因组attB位点(Bacterial attachment site)间的单向重组.为探讨它能否应用于卵母细胞特定基因的重组,文章采用卵巢针刺取卵法采集生发泡(GV)期小鼠卵母细胞,将卵透明带糖蛋白3(ZP3)启动子驱动φC31整合酶表达载体pZP3-INT和检测φC31整合酶位点特异性重组功能的重组质粒载体pBCPB+,通过显微注射导入到小鼠卵母细胞中.培养48 h后,RT-PCR检测φC31整合酶mRNA表达以及PCR检测pBCPB+载体发生重组的情况.结果表明:载体pzP3-INT在卵母细胞中表达φC31整合酶mRNA;并且pBCPB+载体发生了位点特异性重组,提示φC31整合酶在卵母细胞中可以介导位点特异性重组反应.
鏈黴菌噬菌體φC31整閤酶是一種位點特異性重組酶(Site-specific recombinase,SSR),可介導鏈黴菌噬菌體attP位點(Phage attachment site)和鏈黴菌基因組attB位點(Bacterial attachment site)間的單嚮重組.為探討它能否應用于卵母細胞特定基因的重組,文章採用卵巢針刺取卵法採集生髮泡(GV)期小鼠卵母細胞,將卵透明帶糖蛋白3(ZP3)啟動子驅動φC31整閤酶錶達載體pZP3-INT和檢測φC31整閤酶位點特異性重組功能的重組質粒載體pBCPB+,通過顯微註射導入到小鼠卵母細胞中.培養48 h後,RT-PCR檢測φC31整閤酶mRNA錶達以及PCR檢測pBCPB+載體髮生重組的情況.結果錶明:載體pzP3-INT在卵母細胞中錶達φC31整閤酶mRNA;併且pBCPB+載體髮生瞭位點特異性重組,提示φC31整閤酶在卵母細胞中可以介導位點特異性重組反應.
련매균서균체φC31정합매시일충위점특이성중조매(Site-specific recombinase,SSR),가개도련매균서균체attP위점(Phage attachment site)화련매균기인조attB위점(Bacterial attachment site)간적단향중조.위탐토타능부응용우란모세포특정기인적중조,문장채용란소침자취란법채집생발포(GV)기소서란모세포,장란투명대당단백3(ZP3)계동자구동φC31정합매표체재체pZP3-INT화검측φC31정합매위점특이성중조공능적중조질립재체pBCPB+,통과현미주사도입도소서란모세포중.배양48 h후,RT-PCR검측φC31정합매mRNA표체이급PCR검측pBCPB+재체발생중조적정황.결과표명:재체pzP3-INT재란모세포중표체φC31정합매mRNA;병차pBCPB+재체발생료위점특이성중조,제시φC31정합매재란모세포중가이개도위점특이성중조반응.
