CAJ | 학술논문

背景:成体骨髓源性干细胞是实施细胞治疗的重要细胞来源.对成体骨髓源性干细胞的示踪,是研究其移行、分化的规律与机制并进一步阐明再生潜能、疗效的关键.目的:探讨经转染后的成体骨髓呈克隆样干细胞,在细胞表型、增殖能力、心肌分化潜能是否存在的影响.方法:应用核转染技术利用U-23程序将编码maxGFP报告基因的载体对成体骨髓呈克隆样干细胞进行转染,应用MTT法对核转染前后的生长曲线进行测定,使用3 μmol/L 5-氮胞苷对核转染前后成体骨髓呈克隆样干细胞进行向心肌分化诱导,并利用RT-PCR对向心肌分化的特异性标记物GATA4与MLC-2v的表达进行测定.使用成年SD大鼠心肌梗死左前降支结扎模型,对使用经maxGFP转染的成体骨髓呈克隆样干细胞施心内注射并于注射后的第2天和第7天对经注射心脏行冰冻切片并观察maxGFP在体内的表达情况.结果与结论:经核转染24 h后,第47代及第119代成体骨髓呈克隆样干细胞的转染率为49.4%和43.1%,转染后5 h,开始出现呈绿色荧光阳性的细胞,经核转染后仍能保持小圆球形、可贴壁、呈克隆样生长.MTT检测结果显示:核转染前后第47代及第119代均具有相似的生长曲线.核转染前第47代及119代细胞平均群体倍增时间分别为8.57,10.28 h;核转染后分别为9.42,10.42 h,各代前后比较差异无显著性意义(P=0.551,P=0.774).RT-PCR检测结果显示:核转染前5-氮胞苷处理前后均表达GATA4,处理后MLC-2v条带更强;核转染后5-氮胞苷处理前后均表达GATA4,处理后MLC-2v条带更强,上述2个向心肌分化指标于转染前后变化并不明显.体内实验结果:心内注射经核转染后的成体骨髓呈克隆样干细胞,第2天及第7天可在经注射心肌中发现有少量绿色荧光阳性的细胞.提示,核转染可快速地将外源基因导入细胞,经核转染后的成体骨髓呈克隆样干细胞仍能保持其细胞形态、增殖能力及向心肌分化潜能,然而,经maxGFP基因核转染的成体骨髓呈克隆样干细胞,移植入心肌后只有少数细胞能表达经转染基因. 揹景:成體骨髓源性榦細胞是實施細胞治療的重要細胞來源.對成體骨髓源性榦細胞的示蹤,是研究其移行、分化的規律與機製併進一步闡明再生潛能、療效的關鍵.目的:探討經轉染後的成體骨髓呈剋隆樣榦細胞,在細胞錶型、增殖能力、心肌分化潛能是否存在的影響.方法:應用覈轉染技術利用U-23程序將編碼maxGFP報告基因的載體對成體骨髓呈剋隆樣榦細胞進行轉染,應用MTT法對覈轉染前後的生長麯線進行測定,使用3 μmol/L 5-氮胞苷對覈轉染前後成體骨髓呈剋隆樣榦細胞進行嚮心肌分化誘導,併利用RT-PCR對嚮心肌分化的特異性標記物GATA4與MLC-2v的錶達進行測定.使用成年SD大鼠心肌梗死左前降支結扎模型,對使用經maxGFP轉染的成體骨髓呈剋隆樣榦細胞施心內註射併于註射後的第2天和第7天對經註射心髒行冰凍切片併觀察maxGFP在體內的錶達情況.結果與結論:經覈轉染24 h後,第47代及第119代成體骨髓呈剋隆樣榦細胞的轉染率為49.4%和43.1%,轉染後5 h,開始齣現呈綠色熒光暘性的細胞,經覈轉染後仍能保持小圓毬形、可貼壁、呈剋隆樣生長.MTT檢測結果顯示:覈轉染前後第47代及第119代均具有相似的生長麯線.覈轉染前第47代及119代細胞平均群體倍增時間分彆為8.57,10.28 h;覈轉染後分彆為9.42,10.42 h,各代前後比較差異無顯著性意義(P=0.551,P=0.774).RT-PCR檢測結果顯示:覈轉染前5-氮胞苷處理前後均錶達GATA4,處理後MLC-2v條帶更彊;覈轉染後5-氮胞苷處理前後均錶達GATA4,處理後MLC-2v條帶更彊,上述2箇嚮心肌分化指標于轉染前後變化併不明顯.體內實驗結果:心內註射經覈轉染後的成體骨髓呈剋隆樣榦細胞,第2天及第7天可在經註射心肌中髮現有少量綠色熒光暘性的細胞.提示,覈轉染可快速地將外源基因導入細胞,經覈轉染後的成體骨髓呈剋隆樣榦細胞仍能保持其細胞形態、增殖能力及嚮心肌分化潛能,然而,經maxGFP基因覈轉染的成體骨髓呈剋隆樣榦細胞,移植入心肌後隻有少數細胞能錶達經轉染基因.
배경:성체골수원성간세포시실시세포치료적중요세포래원.대성체골수원성간세포적시종,시연구기이행、분화적규률여궤제병진일보천명재생잠능、료효적관건.목적:탐토경전염후적성체골수정극륭양간세포,재세포표형、증식능력、심기분화잠능시부존재적영향.방법:응용핵전염기술이용U-23정서장편마maxGFP보고기인적재체대성체골수정극륭양간세포진행전염,응용MTT법대핵전염전후적생장곡선진행측정,사용3 μmol/L 5-담포감대핵전염전후성체골수정극륭양간세포진행향심기분화유도,병이용RT-PCR대향심기분화적특이성표기물GATA4여MLC-2v적표체진행측정.사용성년SD대서심기경사좌전강지결찰모형,대사용경maxGFP전염적성체골수정극륭양간세포시심내주사병우주사후적제2천화제7천대경주사심장행빙동절편병관찰maxGFP재체내적표체정황.결과여결론:경핵전염24 h후,제47대급제119대성체골수정극륭양간세포적전염솔위49.4%화43.1%,전염후5 h,개시출현정록색형광양성적세포,경핵전염후잉능보지소원구형、가첩벽、정극륭양생장.MTT검측결과현시:핵전염전후제47대급제119대균구유상사적생장곡선.핵전염전제47대급119대세포평균군체배증시간분별위8.57,10.28 h;핵전염후분별위9.42,10.42 h,각대전후비교차이무현저성의의(P=0.551,P=0.774).RT-PCR검측결과현시:핵전염전5-담포감처리전후균표체GATA4,처리후MLC-2v조대경강;핵전염후5-담포감처리전후균표체GATA4,처리후MLC-2v조대경강,상술2개향심기분화지표우전염전후변화병불명현.체내실험결과:심내주사경핵전염후적성체골수정극륭양간세포,제2천급제7천가재경주사심기중발현유소량록색형광양성적세포.제시,핵전염가쾌속지장외원기인도입세포,경핵전염후적성체골수정극륭양간세포잉능보지기세포형태、증식능력급향심기분화잠능,연이,경maxGFP기인핵전염적성체골수정극륭양간세포,이식입심기후지유소수세포능표체경전염기인.