CAJ | 학술논문

目的:采用酵母双杂技术筛选与受翻译调节的肿瘤蛋白(translationally controlled tumor protein,TCTP)相互作用的蛋白,以探讨TCTP的生物学功能.方法:采用PCR法扩增获得TCTP基因,并将其插入酵母双杂交诱饵载体中构建获得pDEST32-TCTP;检测pDEST32-TCTP在酵母菌中的表达和自激活情况,利用酵母双杂交系统筛选出带有靶蛋白基因的阳性克隆并测序鉴定；免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)法验证人肝癌细胞Huh7中TCTP与细胞S期激酶相关蛋白-2(S-phase kinase-associated protein 2,Skp2)的相互作用.结果:成功构建获得酵母双杂交诱饵载体pDEST32-TCTP,pDEST32-TCTP在酵母菌中可以表达,且在3-氨基-1,2,4-三唑(3-amino-1,2,4-triazole,3AT)浓度为20 mmol/L时无自激活作用.采用酵母双杂交系统共筛选获得6个可与TCTP相互作用蛋白的基因,包括Smad4、人热休克蛋白60 (heat shock protein 60,HSP60)、TAK1、Bcl-x1、卵泡抑素( follistatin,FS)和Skp2.其中Skp2与TCTP蛋白的相互作用在Co-IP中得到验证.结论:应用酵母双杂交系统可筛选获得一组与TCTP相互作用的蛋白,为进一步研究TCTP的生物学功能提供了可靠的实验依据.
목적:채용효모쌍잡기술사선여수번역조절적종류단백(translationally controlled tumor protein,TCTP)상호작용적단백,이탐토TCTP적생물학공능.방법:채용PCR법확증획득TCTP기인,병장기삽입효모쌍잡교유이재체중구건획득pDEST32-TCTP;검측pDEST32-TCTP재효모균중적표체화자격활정황,이용효모쌍잡교계통사선출대유파단백기인적양성극륭병측서감정；면역공침정(co-immunoprecipitation,Co-IP)법험증인간암세포Huh7중TCTP여세포S기격매상관단백-2(S-phase kinase-associated protein 2,Skp2)적상호작용.결과:성공구건획득효모쌍잡교유이재체pDEST32-TCTP,pDEST32-TCTP재효모균중가이표체,차재3-안기-1,2,4-삼서(3-amino-1,2,4-triazole,3AT)농도위20 mmol/L시무자격활작용.채용효모쌍잡교계통공사선획득6개가여TCTP상호작용단백적기인,포괄Smad4、인열휴극단백60 (heat shock protein 60,HSP60)、TAK1、Bcl-x1、란포억소( follistatin,FS)화Skp2.기중Skp2여TCTP단백적상호작용재Co-IP중득도험증.결론:응용효모쌍잡교계통가사선획득일조여TCTP상호작용적단백,위진일보연구TCTP적생물학공능제공료가고적실험의거.