中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2012年
2期
216-221
,共6页
郑辉%薛松%连锋%胡振雷%汪永义
鄭輝%薛鬆%連鋒%鬍振雷%汪永義
정휘%설송%련봉%호진뢰%왕영의
同源盒%转染%血管平滑肌细胞%细胞增殖%细胞运动%细胞周期
同源盒%轉染%血管平滑肌細胞%細胞增殖%細胞運動%細胞週期
동원합%전염%혈관평활기세포%세포증식%세포운동%세포주기
目的:探讨腺病毒介导人生长终止特异性同源异型盒基因(hGax基因)转染对血清刺激后兔血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、迁移和细胞周期的影响,为静脉桥再狭窄基因治疗新策略提供帮助.方法:构建含hGax的重组腺病毒载体并感染兔VSMCs;应用RT-PCR、免疫荧光染色检测hGax mRNA和蛋白的表达;MTT法观察hGax基因过表达对血清刺激后VSMCs增殖的影响;划痕法测定细胞迁移;流式分析细胞周期.结果:成功构建Ad5-hGax重组腺病毒载体.转染48 h后 RT-PCR和免疫荧光染色法示转染hGax基因的VSMCs中存在目的基因特异性片段(174 bp)和目的蛋白表达;MTT法示hGax蛋白显著抑制血清刺激后VSMCs增殖;划痕法示hGax基因过表达明显抑制血清刺激后VSMCs迁移;流式结果示血清刺激72 h后,Ad5-hGax转染组G0/G1期细胞比例明显增加,G2/M+S期细胞减少.结论:含hGax的重组腺病毒载体构建成功,并在细胞中过表达.hGax基因过表达能有效抑制血清刺激后兔VSMCs的增殖和迁移,并使细胞停滞于G0/G1期.
目的:探討腺病毒介導人生長終止特異性同源異型盒基因(hGax基因)轉染對血清刺激後兔血管平滑肌細胞(VSMCs)增殖、遷移和細胞週期的影響,為靜脈橋再狹窄基因治療新策略提供幫助.方法:構建含hGax的重組腺病毒載體併感染兔VSMCs;應用RT-PCR、免疫熒光染色檢測hGax mRNA和蛋白的錶達;MTT法觀察hGax基因過錶達對血清刺激後VSMCs增殖的影響;劃痕法測定細胞遷移;流式分析細胞週期.結果:成功構建Ad5-hGax重組腺病毒載體.轉染48 h後 RT-PCR和免疫熒光染色法示轉染hGax基因的VSMCs中存在目的基因特異性片段(174 bp)和目的蛋白錶達;MTT法示hGax蛋白顯著抑製血清刺激後VSMCs增殖;劃痕法示hGax基因過錶達明顯抑製血清刺激後VSMCs遷移;流式結果示血清刺激72 h後,Ad5-hGax轉染組G0/G1期細胞比例明顯增加,G2/M+S期細胞減少.結論:含hGax的重組腺病毒載體構建成功,併在細胞中過錶達.hGax基因過錶達能有效抑製血清刺激後兔VSMCs的增殖和遷移,併使細胞停滯于G0/G1期.
목적:탐토선병독개도인생장종지특이성동원이형합기인(hGax기인)전염대혈청자격후토혈관평활기세포(VSMCs)증식、천이화세포주기적영향,위정맥교재협착기인치료신책략제공방조.방법:구건함hGax적중조선병독재체병감염토VSMCs;응용RT-PCR、면역형광염색검측hGax mRNA화단백적표체;MTT법관찰hGax기인과표체대혈청자격후VSMCs증식적영향;화흔법측정세포천이;류식분석세포주기.결과:성공구건Ad5-hGax중조선병독재체.전염48 h후 RT-PCR화면역형광염색법시전염hGax기인적VSMCs중존재목적기인특이성편단(174 bp)화목적단백표체;MTT법시hGax단백현저억제혈청자격후VSMCs증식;화흔법시hGax기인과표체명현억제혈청자격후VSMCs천이;류식결과시혈청자격72 h후,Ad5-hGax전염조G0/G1기세포비례명현증가,G2/M+S기세포감소.결론:함hGax적중조선병독재체구건성공,병재세포중과표체.hGax기인과표체능유효억제혈청자격후토VSMCs적증식화천이,병사세포정체우G0/G1기.
