中国老年学杂志
中國老年學雜誌
중국노년학잡지
CHINESE JOURNAL OF GERONTOLOGY
2011年
24期
4864-4867
,共4页
杨明花%王帅%田昕%李妍%隋承光
楊明花%王帥%田昕%李妍%隋承光
양명화%왕수%전흔%리연%수승광
腺病毒%基因表达%前列腺特异性膜抗原(PSMA)
腺病毒%基因錶達%前列腺特異性膜抗原(PSMA)
선병독%기인표체%전렬선특이성막항원(PSMA)
目的 体外构建含有人前列腺特异性膜抗原(PSMA)基因的重组腺病毒载体,并检测其在HEK293细胞中的表达.方法 设计一对含有SfiI酶切位点的PSMA基因上下游引物,以质粒pCMV-SPORT6/PSMA为模板,通过PCR扩增获得PSMA基因全序列.片段回收后经酶切处理,连接到穿梭质粒pShuttle-CMV-EGFP上,获得重组穿梭质粒pShuttle-EGFP-PSMA.经SfiI酶切、PCR及插入片段测序鉴定正确后,将其用I-CeuI和I-SceI双酶切处理,转移到pAdxsi载体上,得到pAdxsi-GFP-PSMA病毒质粒,线性化后经HEK293细胞包装成复制缺陷型腺病毒Ad-PSMA,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,RT-PCR,Western印迹检测目的基因人PSMA的表达.结果 成功构建了含有人PSMA基因的重组腺病毒,病毒滴度为2×1010 pfu/ml.Western印迹检测可见PSMA蛋白的正确表达.结论 该重组腺病毒载体的成功构建及表达,为下一步以人PSMA作为靶抗原构建DC疫苗和基因免疫治疗奠定基础.
目的 體外構建含有人前列腺特異性膜抗原(PSMA)基因的重組腺病毒載體,併檢測其在HEK293細胞中的錶達.方法 設計一對含有SfiI酶切位點的PSMA基因上下遊引物,以質粒pCMV-SPORT6/PSMA為模闆,通過PCR擴增穫得PSMA基因全序列.片段迴收後經酶切處理,連接到穿梭質粒pShuttle-CMV-EGFP上,穫得重組穿梭質粒pShuttle-EGFP-PSMA.經SfiI酶切、PCR及插入片段測序鑒定正確後,將其用I-CeuI和I-SceI雙酶切處理,轉移到pAdxsi載體上,得到pAdxsi-GFP-PSMA病毒質粒,線性化後經HEK293細胞包裝成複製缺陷型腺病毒Ad-PSMA,通過觀察綠色熒光蛋白(GFP)的錶達,RT-PCR,Western印跡檢測目的基因人PSMA的錶達.結果 成功構建瞭含有人PSMA基因的重組腺病毒,病毒滴度為2×1010 pfu/ml.Western印跡檢測可見PSMA蛋白的正確錶達.結論 該重組腺病毒載體的成功構建及錶達,為下一步以人PSMA作為靶抗原構建DC疫苗和基因免疫治療奠定基礎.
목적 체외구건함유인전렬선특이성막항원(PSMA)기인적중조선병독재체,병검측기재HEK293세포중적표체.방법 설계일대함유SfiI매절위점적PSMA기인상하유인물,이질립pCMV-SPORT6/PSMA위모판,통과PCR확증획득PSMA기인전서렬.편단회수후경매절처리,련접도천사질립pShuttle-CMV-EGFP상,획득중조천사질립pShuttle-EGFP-PSMA.경SfiI매절、PCR급삽입편단측서감정정학후,장기용I-CeuI화I-SceI쌍매절처리,전이도pAdxsi재체상,득도pAdxsi-GFP-PSMA병독질립,선성화후경HEK293세포포장성복제결함형선병독Ad-PSMA,통과관찰록색형광단백(GFP)적표체,RT-PCR,Western인적검측목적기인인PSMA적표체.결과 성공구건료함유인PSMA기인적중조선병독,병독적도위2×1010 pfu/ml.Western인적검측가견PSMA단백적정학표체.결론 해중조선병독재체적성공구건급표체,위하일보이인PSMA작위파항원구건DC역묘화기인면역치료전정기출.
