同济大学学报（医学版）
同濟大學學報（醫學版）
동제대학학보（의학판）
JOURNAL OF TONGJI UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCE)
2008年
4期
17-21,26
,共6页
窦帮%马晓辉%梅炯%童天朗%蔡宣松
竇幫%馬曉輝%梅炯%童天朗%蔡宣鬆
두방%마효휘%매형%동천랑%채선송
细胞系%腺病毒载体%骨肉瘤%内皮抑素%抗血管生成%小鼠
細胞繫%腺病毒載體%骨肉瘤%內皮抑素%抗血管生成%小鼠
세포계%선병독재체%골육류%내피억소%항혈관생성%소서
目的 构建腺病毒介导的小鼠内皮抑素并观察其在体内、外的表达及对血管的抑制作用.方法 以mEndostatin质粒为模板通过PCR方法扩增回收mEndostatin基因,将mEndostatin基因连接到腺病毒载体DC315中,构建PDC315-mEndo表达质粒.将此表达质粒与腺病毒重组质粒pBGHE3通过lipofectamine 2000共同转染293细胞,经同源重组产生重组腺病毒Ad-mEndo,用氯化铯密度梯度超速离心法纯化.用50%组织培养感染剂量法测定病毒滴度.体外转染骨肉瘤细胞株MG-63,用western印迹检测感染的骨肉瘤细胞上清夜mEndostatin的表达并通过鸡胚绒毛尿囊膜实验(chorioatlantoic membrane,CAM)观察其抑制血管生成的活性.结果 酶切、PeR及DNA测序鉴定表明成功构建了携带内皮抑素(Endostatin,ES)融合基因的重组腺病毒载体,而在鸡胚绒毛尿囊膜血管生成实验中加入培养物上清的实验组与对照组相比鸡胚尿囊膜血管密度稀疏,平均血管数差异明显(P＜0.01).结论 腺病毒介导的小鼠内皮抑素基因在体外获得高效表达,并可显著抑制血管生成.
目的 構建腺病毒介導的小鼠內皮抑素併觀察其在體內、外的錶達及對血管的抑製作用.方法 以mEndostatin質粒為模闆通過PCR方法擴增迴收mEndostatin基因,將mEndostatin基因連接到腺病毒載體DC315中,構建PDC315-mEndo錶達質粒.將此錶達質粒與腺病毒重組質粒pBGHE3通過lipofectamine 2000共同轉染293細胞,經同源重組產生重組腺病毒Ad-mEndo,用氯化銫密度梯度超速離心法純化.用50%組織培養感染劑量法測定病毒滴度.體外轉染骨肉瘤細胞株MG-63,用western印跡檢測感染的骨肉瘤細胞上清夜mEndostatin的錶達併通過鷄胚絨毛尿囊膜實驗(chorioatlantoic membrane,CAM)觀察其抑製血管生成的活性.結果 酶切、PeR及DNA測序鑒定錶明成功構建瞭攜帶內皮抑素(Endostatin,ES)融閤基因的重組腺病毒載體,而在鷄胚絨毛尿囊膜血管生成實驗中加入培養物上清的實驗組與對照組相比鷄胚尿囊膜血管密度稀疏,平均血管數差異明顯(P＜0.01).結論 腺病毒介導的小鼠內皮抑素基因在體外穫得高效錶達,併可顯著抑製血管生成.
목적 구건선병독개도적소서내피억소병관찰기재체내、외적표체급대혈관적억제작용.방법 이mEndostatin질립위모판통과PCR방법확증회수mEndostatin기인,장mEndostatin기인련접도선병독재체DC315중,구건PDC315-mEndo표체질립.장차표체질립여선병독중조질립pBGHE3통과lipofectamine 2000공동전염293세포,경동원중조산생중조선병독Ad-mEndo,용록화색밀도제도초속리심법순화.용50%조직배양감염제량법측정병독적도.체외전염골육류세포주MG-63,용western인적검측감염적골육류세포상청야mEndostatin적표체병통과계배융모뇨낭막실험(chorioatlantoic membrane,CAM)관찰기억제혈관생성적활성.결과 매절、PeR급DNA측서감정표명성공구건료휴대내피억소(Endostatin,ES)융합기인적중조선병독재체,이재계배융모뇨낭막혈관생성실험중가입배양물상청적실험조여대조조상비계배뇨낭막혈관밀도희소,평균혈관수차이명현(P＜0.01).결론 선병독개도적소서내피억소기인재체외획득고효표체,병가현저억제혈관생성.
