中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2008年
9期
749-751
,共3页
宿晓云%王毅%王芳%石毅%周余来%王秀娟%颜炜群
宿曉雲%王毅%王芳%石毅%週餘來%王秀娟%顏煒群
숙효운%왕의%왕방%석의%주여래%왕수연%안위군
抗乙型肝炎病毒表面抗体%重链%轻链%毕赤酵母%筛选%序列分析
抗乙型肝炎病毒錶麵抗體%重鏈%輕鏈%畢赤酵母%篩選%序列分析
항을형간염병독표면항체%중련%경련%필적효모%사선%서렬분석
目的 克隆、筛选人抗乙型肝炎病毒表面抗体(抗-HBs),并对其基因序列进行分析.方法 从抗-HBs抗体阳性血液中分离淋巴细胞,提取总RNA,合成cDNA,以此为模板,PCR扩增轻链和重链抗体可变区基因;应用已构建的抗体支架载体,构建重组表达载体,转化毕赤酵母X33,建立相应的酵母表达文库;甲醇诱导表达,Western blot及ELISA筛选抗-HBs抗体阳性菌株;PCR扩增DNA片段,进行测序及Blasm比对,并与已发表的抗-HBs抗体序列进行同源性分析.结果 重链及轻链抗体重组表达载体经双酶切鉴定,证明构建正确;经Western blot及ELISA筛选,获得了具有HBsAg结合活性的完整轻重链抗体;轻链可变区与已发表序列核苷酸同源性为93%,而氨基酸同源性仅为88%,尤其CDR3变异较大;重链可变区与已发表序列同源性较低,CDR3区基因长度及序列均有较大差别.结论 应用毕赤酵母表达体系筛选,获得了新的抗-HBs抗体.
目的 剋隆、篩選人抗乙型肝炎病毒錶麵抗體(抗-HBs),併對其基因序列進行分析.方法 從抗-HBs抗體暘性血液中分離淋巴細胞,提取總RNA,閤成cDNA,以此為模闆,PCR擴增輕鏈和重鏈抗體可變區基因;應用已構建的抗體支架載體,構建重組錶達載體,轉化畢赤酵母X33,建立相應的酵母錶達文庫;甲醇誘導錶達,Western blot及ELISA篩選抗-HBs抗體暘性菌株;PCR擴增DNA片段,進行測序及Blasm比對,併與已髮錶的抗-HBs抗體序列進行同源性分析.結果 重鏈及輕鏈抗體重組錶達載體經雙酶切鑒定,證明構建正確;經Western blot及ELISA篩選,穫得瞭具有HBsAg結閤活性的完整輕重鏈抗體;輕鏈可變區與已髮錶序列覈苷痠同源性為93%,而氨基痠同源性僅為88%,尤其CDR3變異較大;重鏈可變區與已髮錶序列同源性較低,CDR3區基因長度及序列均有較大差彆.結論 應用畢赤酵母錶達體繫篩選,穫得瞭新的抗-HBs抗體.
목적 극륭、사선인항을형간염병독표면항체(항-HBs),병대기기인서렬진행분석.방법 종항-HBs항체양성혈액중분리림파세포,제취총RNA,합성cDNA,이차위모판,PCR확증경련화중련항체가변구기인;응용이구건적항체지가재체,구건중조표체재체,전화필적효모X33,건립상응적효모표체문고;갑순유도표체,Western blot급ELISA사선항-HBs항체양성균주;PCR확증DNA편단,진행측서급Blasm비대,병여이발표적항-HBs항체서렬진행동원성분석.결과 중련급경련항체중조표체재체경쌍매절감정,증명구건정학;경Western blot급ELISA사선,획득료구유HBsAg결합활성적완정경중련항체;경련가변구여이발표서렬핵감산동원성위93%,이안기산동원성부위88%,우기CDR3변이교대;중련가변구여이발표서렬동원성교저,CDR3구기인장도급서렬균유교대차별.결론 응용필적효모표체체계사선,획득료신적항-HBs항체.
