CAJ | 학술논문

目的:探讨信号接头蛋白crk在宫颈癌恶性潜能中发挥的作用,以及RNA干扰沉默宫颈癌Caski细胞株中的crk基因表达后,观察能否有效阻抑宫颈癌Caski细胞的增殖、侵袭和转移等恶性潜能.方法:将构建有crk基因的RNA干扰载体 pSUPER-crki,采用脂质体介导法转染Caski细胞;随后采用RT-PCR和Western 印迹法检测各组细胞转染前后crk mRNA和蛋白表达水平的变化;用细胞生长曲线、软琼脂克隆形成实验、Transwell小室体外侵袭实验、细胞骨架荧光染色等方法,检测宫颈癌细胞生物学行为的变化.结果:Western 印迹法检测证实,Caski细胞中存在着高表达的crk蛋白;转染pSUPER-Crki质粒后,能明显抑制Caski细胞内源性crk mRNA和蛋白的表达;crk mRNA表达水平下降74.8 %,蛋白表达水平下降72.4 %.crk-RNAi组与空白对照组及空载体组比较,细胞生长速度减慢、软琼脂克隆形成率下降、穿过人工基底膜的细胞数减少(P<0.05),其细胞的黏着斑减少,骨架染色也明显弱于以上2种对照组细胞.结论:信号接头蛋白crk可能参与宫颈癌Caski细胞的黏着斑组装和细胞骨架重组,诱发癌细胞增殖、侵袭、转移等恶性潜能.以crk基因为靶向的RNAi可有效抑制Caski细胞中的crk基因的表达,能有效阻抑Caski的恶性潜能,有望成为新的宫颈癌基因治疗的分子靶点.
목적:탐토신호접두단백crk재궁경암악성잠능중발휘적작용,이급RNA간우침묵궁경암Caski세포주중적crk기인표체후,관찰능부유효조억궁경암Caski세포적증식、침습화전이등악성잠능.방법:장구건유crk기인적RNA간우재체 pSUPER-crki,채용지질체개도법전염Caski세포;수후채용RT-PCR화Western 인적법검측각조세포전염전후crk mRNA화단백표체수평적변화;용세포생장곡선、연경지극륭형성실험、Transwell소실체외침습실험、세포골가형광염색등방법,검측궁경암세포생물학행위적변화.결과:Western 인적법검측증실,Caski세포중존재착고표체적crk단백;전염pSUPER-Crki질립후,능명현억제Caski세포내원성crk mRNA화단백적표체;crk mRNA표체수평하강74.8 %,단백표체수평하강72.4 %.crk-RNAi조여공백대조조급공재체조비교,세포생장속도감만、연경지극륭형성솔하강、천과인공기저막적세포수감소(P<0.05),기세포적점착반감소,골가염색야명현약우이상2충대조조세포.결론:신호접두단백crk가능삼여궁경암Caski세포적점착반조장화세포골가중조,유발암세포증식、침습、전이등악성잠능.이crk기인위파향적RNAi가유효억제Caski세포중적crk기인적표체,능유효조억Caski적악성잠능,유망성위신적궁경암기인치료적분자파점.