中华医学杂志
中華醫學雜誌
중화의학잡지
National Medical Journal of China
2007年
28期
1987-1990
,共4页
李惠明%王丰%韦芳%董小岩%王慧萍%裘玮%张巨峰%陈霞芳%吴小兵%黄倩
李惠明%王豐%韋芳%董小巖%王慧萍%裘瑋%張巨峰%陳霞芳%吳小兵%黃倩
리혜명%왕봉%위방%동소암%왕혜평%구위%장거봉%진하방%오소병%황천
肿瘤%基因疗法%腺病毒,人%腺相关病毒%转导
腫瘤%基因療法%腺病毒,人%腺相關病毒%轉導
종류%기인요법%선병독,인%선상관병독%전도
目的 探讨小量腺病毒作为辅助病毒能否增强腺相关病毒(AAV)对肿瘤细胞和裸鼠肿瘤模型的转导效率并对增强的机理进行初步探讨.方法 采用绿色荧光蛋白(EGFP)标记的AAV2联合不同滴度的非复制型腺病毒(Ad-null)感染人非小细胞肺癌细胞系(AAV2+Ad-null组),并以相同剂量的AAV2单独感染(AAV2组)作为对照.用荧光显微镜观察EGFP阳性细胞,流式细胞仪检测EGFP阳性细胞的百分率和单个细胞平均荧光强度,Western印迹检测EGFP蛋白表达的变化以比较各组病毒转导效率.换用萤光素酶(Luc)标记的AAV2,通过Luc检测系统检测两组对体外肿瘤细胞及裸鼠肿瘤模型的转导效率.荧光定量PCR检测感染后肿瘤细胞DNA及mRNA的EGFP相对拷贝数,观察Ad-null对AAV2复制及转录的影响.结果 随着Ad-null滴度的增加,AAV2+Ad-null组的肿瘤细胞EGFP阳性细胞数明显增加.流式细胞仪计数的EGFP阳性细胞率按0.01、0.1、1、10 MOI Ad-null滴度依次为10.9%,18.0%,36.2%,55.2%,明显高于AAV2组(6.4%).AAV2+10 MOI Ad-null组单个细胞的荧光强度约为AAV2组的1.32倍.各AAV2+Ad-null组EGFP在细胞中的蛋白表达水平也均高于AAV2组.体外、体内Luc检测均显示Ad-null显著增强AAV2对肿瘤的转导效率,荧光素信号分别为AAV2单独感染的28和4.5倍.Ad-null可提高肿瘤细胞内AAV2的mRNA水平,当Ad-null滴度为1、10 MOI时AAV2+Ad-null组的EGFP拷贝数明显高于AAV2组,而Ad-null对细胞内AAV2的DNA影响不大,AAV2+Ad-null组与AAV2组的EGFP拷贝数差别不大.结论 联合使用少量腺病毒可明显提高AAV对肿瘤细胞的转导效率,可能与其提高AAV转录水平有关,为今后应用AAV作为肿瘤基因治疗的载体提供了实验证据.
目的 探討小量腺病毒作為輔助病毒能否增彊腺相關病毒(AAV)對腫瘤細胞和裸鼠腫瘤模型的轉導效率併對增彊的機理進行初步探討.方法 採用綠色熒光蛋白(EGFP)標記的AAV2聯閤不同滴度的非複製型腺病毒(Ad-null)感染人非小細胞肺癌細胞繫(AAV2+Ad-null組),併以相同劑量的AAV2單獨感染(AAV2組)作為對照.用熒光顯微鏡觀察EGFP暘性細胞,流式細胞儀檢測EGFP暘性細胞的百分率和單箇細胞平均熒光彊度,Western印跡檢測EGFP蛋白錶達的變化以比較各組病毒轉導效率.換用螢光素酶(Luc)標記的AAV2,通過Luc檢測繫統檢測兩組對體外腫瘤細胞及裸鼠腫瘤模型的轉導效率.熒光定量PCR檢測感染後腫瘤細胞DNA及mRNA的EGFP相對拷貝數,觀察Ad-null對AAV2複製及轉錄的影響.結果 隨著Ad-null滴度的增加,AAV2+Ad-null組的腫瘤細胞EGFP暘性細胞數明顯增加.流式細胞儀計數的EGFP暘性細胞率按0.01、0.1、1、10 MOI Ad-null滴度依次為10.9%,18.0%,36.2%,55.2%,明顯高于AAV2組(6.4%).AAV2+10 MOI Ad-null組單箇細胞的熒光彊度約為AAV2組的1.32倍.各AAV2+Ad-null組EGFP在細胞中的蛋白錶達水平也均高于AAV2組.體外、體內Luc檢測均顯示Ad-null顯著增彊AAV2對腫瘤的轉導效率,熒光素信號分彆為AAV2單獨感染的28和4.5倍.Ad-null可提高腫瘤細胞內AAV2的mRNA水平,噹Ad-null滴度為1、10 MOI時AAV2+Ad-null組的EGFP拷貝數明顯高于AAV2組,而Ad-null對細胞內AAV2的DNA影響不大,AAV2+Ad-null組與AAV2組的EGFP拷貝數差彆不大.結論 聯閤使用少量腺病毒可明顯提高AAV對腫瘤細胞的轉導效率,可能與其提高AAV轉錄水平有關,為今後應用AAV作為腫瘤基因治療的載體提供瞭實驗證據.
목적 탐토소량선병독작위보조병독능부증강선상관병독(AAV)대종류세포화라서종류모형적전도효솔병대증강적궤리진행초보탐토.방법 채용록색형광단백(EGFP)표기적AAV2연합불동적도적비복제형선병독(Ad-null)감염인비소세포폐암세포계(AAV2+Ad-null조),병이상동제량적AAV2단독감염(AAV2조)작위대조.용형광현미경관찰EGFP양성세포,류식세포의검측EGFP양성세포적백분솔화단개세포평균형광강도,Western인적검측EGFP단백표체적변화이비교각조병독전도효솔.환용형광소매(Luc)표기적AAV2,통과Luc검측계통검측량조대체외종류세포급라서종류모형적전도효솔.형광정량PCR검측감염후종류세포DNA급mRNA적EGFP상대고패수,관찰Ad-null대AAV2복제급전록적영향.결과 수착Ad-null적도적증가,AAV2+Ad-null조적종류세포EGFP양성세포수명현증가.류식세포의계수적EGFP양성세포솔안0.01、0.1、1、10 MOI Ad-null적도의차위10.9%,18.0%,36.2%,55.2%,명현고우AAV2조(6.4%).AAV2+10 MOI Ad-null조단개세포적형광강도약위AAV2조적1.32배.각AAV2+Ad-null조EGFP재세포중적단백표체수평야균고우AAV2조.체외、체내Luc검측균현시Ad-null현저증강AAV2대종류적전도효솔,형광소신호분별위AAV2단독감염적28화4.5배.Ad-null가제고종류세포내AAV2적mRNA수평,당Ad-null적도위1、10 MOI시AAV2+Ad-null조적EGFP고패수명현고우AAV2조,이Ad-null대세포내AAV2적DNA영향불대,AAV2+Ad-null조여AAV2조적EGFP고패수차별불대.결론 연합사용소량선병독가명현제고AAV대종류세포적전도효솔,가능여기제고AAV전록수평유관,위금후응용AAV작위종류기인치료적재체제공료실험증거.
