生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2008年
7期
1312-1316
,共5页
朱大兴%Yanping Wang%杨学勤%Wen Zhu%陈小禾%Zhilin Sun%周清华
硃大興%Yanping Wang%楊學勤%Wen Zhu%陳小禾%Zhilin Sun%週清華
주대흥%Yanping Wang%양학근%Wen Zhu%진소화%Zhilin Sun%주청화
纯化标签%融合蛋白%nm23-H1
純化標籤%融閤蛋白%nm23-H1
순화표첨%융합단백%nm23-H1
以高效原核表达栽体pBV220为骨架载体,应用单链寡核苷酸引物插入法在pBV220多克隆位点的下游插入了六聚组氨酸融合标签编码序列(6×His-Tag)、羟胺和凝血酶蛋白切割位点.并增加了Xho Ⅰ和Kpn Ⅰ酶切位点和强终止密码子TAA,将此新质粒命名为pBV223.以此载体表达的目的蛋白在羧基端(C端)带有六聚组氨酸尾以利于通过固定化金属亲和层析快速纯化目的蛋白,酶切及核苷酸序列分析验证了我们的设计.将终止密码缺失突变的nm23-H1 cDNA克隆入pBV223裁体中,在大肠杆菌DH5α中成功地表达了Nm23-H1蛋白,通过镍(Ni)亲和层析一步即简单、快速地得到了纯化蛋白.我们所应用的单链寡核苷酸引物插入直接进行定向克隆的方法是目前为止最简便的方法.
以高效原覈錶達栽體pBV220為骨架載體,應用單鏈寡覈苷痠引物插入法在pBV220多剋隆位點的下遊插入瞭六聚組氨痠融閤標籤編碼序列(6×His-Tag)、羥胺和凝血酶蛋白切割位點.併增加瞭Xho Ⅰ和Kpn Ⅰ酶切位點和彊終止密碼子TAA,將此新質粒命名為pBV223.以此載體錶達的目的蛋白在羧基耑(C耑)帶有六聚組氨痠尾以利于通過固定化金屬親和層析快速純化目的蛋白,酶切及覈苷痠序列分析驗證瞭我們的設計.將終止密碼缺失突變的nm23-H1 cDNA剋隆入pBV223裁體中,在大腸桿菌DH5α中成功地錶達瞭Nm23-H1蛋白,通過鎳(Ni)親和層析一步即簡單、快速地得到瞭純化蛋白.我們所應用的單鏈寡覈苷痠引物插入直接進行定嚮剋隆的方法是目前為止最簡便的方法.
이고효원핵표체재체pBV220위골가재체,응용단련과핵감산인물삽입법재pBV220다극륭위점적하유삽입료륙취조안산융합표첨편마서렬(6×His-Tag)、간알화응혈매단백절할위점.병증가료Xho Ⅰ화Kpn Ⅰ매절위점화강종지밀마자TAA,장차신질립명명위pBV223.이차재체표체적목적단백재최기단(C단)대유륙취조안산미이리우통과고정화금속친화층석쾌속순화목적단백,매절급핵감산서렬분석험증료아문적설계.장종지밀마결실돌변적nm23-H1 cDNA극륭입pBV223재체중,재대장간균DH5α중성공지표체료Nm23-H1단백,통과얼(Ni)친화층석일보즉간단、쾌속지득도료순화단백.아문소응용적단련과핵감산인물삽입직접진행정향극륭적방법시목전위지최간편적방법.
