生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2008年
8期
899-904
,共6页
李蓓%俞慧清%朱采红%谢发展%陈建泉%成国祥
李蓓%俞慧清%硃採紅%謝髮展%陳建泉%成國祥
리배%유혜청%주채홍%사발전%진건천%성국상
基因敲除%体细胞基因打靶%山羊胎儿成纤维细胞%抗体重链基因(IgH)%沉默基因
基因敲除%體細胞基因打靶%山羊胎兒成纖維細胞%抗體重鏈基因(IgH)%沉默基因
기인고제%체세포기인타파%산양태인성섬유세포%항체중련기인(IgH)%침묵기인
在针对大动物的精确基因修饰研究中,基于体细胞的同源重组是唯一可行与有效的方法.其中,沉默基因位点的重组尤为困难.为获得抗体基因功能缺失的山羊用于人源化抗体的研究,通过体细胞同源重组技术,首次成功地获得了抗体基因敲除的山羊胎儿成纤维细胞株,该细胞株可用于体细胞克隆制备抗体基因功能缺失的转基因山羊.以35日龄的山羊胎儿成纤维细胞(GEF88)基因组DNA为模板,扩增山羊抗体重链J-Cμ基因作为同源臂,构建了同基因型的正负筛选打靶载体GTIgH.将此打靶载体经电穿孔的方法转染GEF88细胞,并通过0.8 mg/L的嘌呤霉素进行药物筛选,获得了362个抗性细胞克隆,PCR、测序及DNA印迹鉴定结果显示,其中的GT211抗性细胞克隆为中靶细胞,该细胞克隆中的抗体重链基因的一条等位基因已被成功敲除.
在針對大動物的精確基因脩飾研究中,基于體細胞的同源重組是唯一可行與有效的方法.其中,沉默基因位點的重組尤為睏難.為穫得抗體基因功能缺失的山羊用于人源化抗體的研究,通過體細胞同源重組技術,首次成功地穫得瞭抗體基因敲除的山羊胎兒成纖維細胞株,該細胞株可用于體細胞剋隆製備抗體基因功能缺失的轉基因山羊.以35日齡的山羊胎兒成纖維細胞(GEF88)基因組DNA為模闆,擴增山羊抗體重鏈J-Cμ基因作為同源臂,構建瞭同基因型的正負篩選打靶載體GTIgH.將此打靶載體經電穿孔的方法轉染GEF88細胞,併通過0.8 mg/L的嘌呤黴素進行藥物篩選,穫得瞭362箇抗性細胞剋隆,PCR、測序及DNA印跡鑒定結果顯示,其中的GT211抗性細胞剋隆為中靶細胞,該細胞剋隆中的抗體重鏈基因的一條等位基因已被成功敲除.
재침대대동물적정학기인수식연구중,기우체세포적동원중조시유일가행여유효적방법.기중,침묵기인위점적중조우위곤난.위획득항체기인공능결실적산양용우인원화항체적연구,통과체세포동원중조기술,수차성공지획득료항체기인고제적산양태인성섬유세포주,해세포주가용우체세포극륭제비항체기인공능결실적전기인산양.이35일령적산양태인성섬유세포(GEF88)기인조DNA위모판,확증산양항체중련J-Cμ기인작위동원비,구건료동기인형적정부사선타파재체GTIgH.장차타파재체경전천공적방법전염GEF88세포,병통과0.8 mg/L적표령매소진행약물사선,획득료362개항성세포극륭,PCR、측서급DNA인적감정결과현시,기중적GT211항성세포극륭위중파세포,해세포극륭중적항체중련기인적일조등위기인이피성공고제.
