临床输血与检验
臨床輸血與檢驗
림상수혈여검험
JOURNAL OF CLINICAL TRANSFUSION AND LABORATORY MEDICINE
2009年
1期
1-5
,共5页
赵亮%罗以勤%姚丽娟%孔建新%濮跃晨%孙安源%张林杰
趙亮%囉以勤%姚麗娟%孔建新%濮躍晨%孫安源%張林傑
조량%라이근%요려연%공건신%복약신%손안원%장림걸
肿瘤坏死因子α%遗传载体%真核细胞%中国仓鼠卵巢细胞
腫瘤壞死因子α%遺傳載體%真覈細胞%中國倉鼠卵巢細胞
종류배사인자α%유전재체%진핵세포%중국창서란소세포
目的 构建人肿瘤坏死因子rhTNF-α分泌型真核表达载体,并检测其在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达.方法 以pGEM-T/sig-tumstatin为模板.扩增与TNF带重叠区的Ⅳ型胶原信号肽sig基因片段,以PBV220-TNF为模板,扩增与sig带重叠区的TNF基因片段.以上述2个扩增产物片段为模板,重叠区扩增拼接法(SOEing)扩增得到sig-TNF.sig-TNF片段经酶切后,插人经同样酶切的pIRESneo3质粒.利用克隆PCR、限制性内切酶消化以及序列测定,对获得的sig-TNF基因片段及重组载体进行验证.将重sig-TNF真核表达载体转染到CHO-K1,并对其表达状况进行检测.结果 所获得的sig-TNF片段(558 bp)序列与报道的序列完全一致,酶切鉴定结果表明含人肿瘤坏死因子的重组pIRESneo3/sig-TNF表达载体构建成功,转染重组pIRESneo3/sig-TNF的CHO-K1分泌表达了人肿瘤坏死因子rhTNF-α.转染了pIRES-neo3/sig-TNF真核表达载体和空载体的CHO-K1和未转染CHO-K1细胞的生长速度没有差别.结论 成功构建了重组人肿瘤坏死因子rhTNF-α分泌型真核表达载体,并获得能稳定表达rhTNF-á的CHO-K1,为开展下一步的实验奠定了基础.
目的 構建人腫瘤壞死因子rhTNF-α分泌型真覈錶達載體,併檢測其在中國倉鼠卵巢細胞中的穩定錶達.方法 以pGEM-T/sig-tumstatin為模闆.擴增與TNF帶重疊區的Ⅳ型膠原信號肽sig基因片段,以PBV220-TNF為模闆,擴增與sig帶重疊區的TNF基因片段.以上述2箇擴增產物片段為模闆,重疊區擴增拼接法(SOEing)擴增得到sig-TNF.sig-TNF片段經酶切後,插人經同樣酶切的pIRESneo3質粒.利用剋隆PCR、限製性內切酶消化以及序列測定,對穫得的sig-TNF基因片段及重組載體進行驗證.將重sig-TNF真覈錶達載體轉染到CHO-K1,併對其錶達狀況進行檢測.結果 所穫得的sig-TNF片段(558 bp)序列與報道的序列完全一緻,酶切鑒定結果錶明含人腫瘤壞死因子的重組pIRESneo3/sig-TNF錶達載體構建成功,轉染重組pIRESneo3/sig-TNF的CHO-K1分泌錶達瞭人腫瘤壞死因子rhTNF-α.轉染瞭pIRES-neo3/sig-TNF真覈錶達載體和空載體的CHO-K1和未轉染CHO-K1細胞的生長速度沒有差彆.結論 成功構建瞭重組人腫瘤壞死因子rhTNF-α分泌型真覈錶達載體,併穫得能穩定錶達rhTNF-á的CHO-K1,為開展下一步的實驗奠定瞭基礎.
목적 구건인종류배사인자rhTNF-α분비형진핵표체재체,병검측기재중국창서란소세포중적은정표체.방법 이pGEM-T/sig-tumstatin위모판.확증여TNF대중첩구적Ⅳ형효원신호태sig기인편단,이PBV220-TNF위모판,확증여sig대중첩구적TNF기인편단.이상술2개확증산물편단위모판,중첩구확증병접법(SOEing)확증득도sig-TNF.sig-TNF편단경매절후,삽인경동양매절적pIRESneo3질립.이용극륭PCR、한제성내절매소화이급서렬측정,대획득적sig-TNF기인편단급중조재체진행험증.장중sig-TNF진핵표체재체전염도CHO-K1,병대기표체상황진행검측.결과 소획득적sig-TNF편단(558 bp)서렬여보도적서렬완전일치,매절감정결과표명함인종류배사인자적중조pIRESneo3/sig-TNF표체재체구건성공,전염중조pIRESneo3/sig-TNF적CHO-K1분비표체료인종류배사인자rhTNF-α.전염료pIRES-neo3/sig-TNF진핵표체재체화공재체적CHO-K1화미전염CHO-K1세포적생장속도몰유차별.결론 성공구건료중조인종류배사인자rhTNF-α분비형진핵표체재체,병획득능은정표체rhTNF-á적CHO-K1,위개전하일보적실험전정료기출.
