化学与生物工程
化學與生物工程
화학여생물공정
CHEMISTRY & BIOENGINEERING
2009年
6期
72-75
,共4页
SOEing%群体感应%绿色荧光蛋白(GFP)%流式细胞计
SOEing%群體感應%綠色熒光蛋白(GFP)%流式細胞計
SOEing%군체감응%록색형광단백(GFP)%류식세포계
根据重叠区延伸基因拼接法(SOEing)设计特别的引物,运用PCR分别从pLuxI-aiiA质粒和pEGFP-N1质粒上扩增海洋费氏弧菌(Vibrio fischeri)荧光素酶操纵子的启动子pLuxI和绿色荧光蛋白基因EGFP.然后利用SOEing法将这两个独立片段拼接得到pLuxI-EGFP融合基因,接着使用Aat Ⅱ、HindⅢ限制性酶双酶切pLuxI-EGFP融合基因和载体pluxCcdB3,再用T4 DNA连接酶进行连接,接着转化DH5α感受态细菌.挑取长出的单克隆培养并抽提质粒,经测序鉴定质粒构建成功.以GFP报告质粒和pLuxRI2质粒共转化DH5α细菌,流式细胞计检测共转化菌有明显的荧光信号.
根據重疊區延伸基因拼接法(SOEing)設計特彆的引物,運用PCR分彆從pLuxI-aiiA質粒和pEGFP-N1質粒上擴增海洋費氏弧菌(Vibrio fischeri)熒光素酶操縱子的啟動子pLuxI和綠色熒光蛋白基因EGFP.然後利用SOEing法將這兩箇獨立片段拼接得到pLuxI-EGFP融閤基因,接著使用Aat Ⅱ、HindⅢ限製性酶雙酶切pLuxI-EGFP融閤基因和載體pluxCcdB3,再用T4 DNA連接酶進行連接,接著轉化DH5α感受態細菌.挑取長齣的單剋隆培養併抽提質粒,經測序鑒定質粒構建成功.以GFP報告質粒和pLuxRI2質粒共轉化DH5α細菌,流式細胞計檢測共轉化菌有明顯的熒光信號.
근거중첩구연신기인병접법(SOEing)설계특별적인물,운용PCR분별종pLuxI-aiiA질립화pEGFP-N1질립상확증해양비씨호균(Vibrio fischeri)형광소매조종자적계동자pLuxI화록색형광단백기인EGFP.연후이용SOEing법장저량개독립편단병접득도pLuxI-EGFP융합기인,접착사용Aat Ⅱ、HindⅢ한제성매쌍매절pLuxI-EGFP융합기인화재체pluxCcdB3,재용T4 DNA련접매진행련접,접착전화DH5α감수태세균.도취장출적단극륭배양병추제질립,경측서감정질립구건성공.이GFP보고질립화pLuxRI2질립공전화DH5α세균,류식세포계검측공전화균유명현적형광신호.
