食品与药品
食品與藥品
식품여약품
FOOD AND DRUG
2010年
3期
158-161
,共4页
肖伟%华迪%汪雅雯%单含文%吕稼锋%赵健
肖偉%華迪%汪雅雯%單含文%呂稼鋒%趙健
초위%화적%왕아문%단함문%려가봉%조건
多聚精氨酸%蛋白转导域%HeLa细胞
多聚精氨痠%蛋白轉導域%HeLa細胞
다취정안산%단백전도역%HeLa세포
目的 构建pET-28a-EGFP-Arg7重组子,观察表达的融合蛋EGFP-Arg7在细胞内的转导活性.方法 构建EGFP-Arg7(阴性对照为EGFP)序列,与pET-28a连接后,转化Ecoli BL21(DE3),IPTG诱导表达,并经Ni2+.NTA纯化.纯化产物作用于HeLa细胞后用荧光显微镜观察其转导活性.结果 重组pET-28a-EGFP-Arg7经酶切鉴定和序列分析,证明构建正确.转化E.coil BL21(DE3)后,重组蛋白获得可溶性表达.纯化后的融合蛋白纯度达90%以上.重组蛋白EGFP-Arg7作用于HeLa细胞后用荧光显微镜可观察到强绿色荧光.结论 Arg7具有很好的转导活性,能携带与其连接的蛋白质穿过HeLa细胞膜.
目的 構建pET-28a-EGFP-Arg7重組子,觀察錶達的融閤蛋EGFP-Arg7在細胞內的轉導活性.方法 構建EGFP-Arg7(陰性對照為EGFP)序列,與pET-28a連接後,轉化Ecoli BL21(DE3),IPTG誘導錶達,併經Ni2+.NTA純化.純化產物作用于HeLa細胞後用熒光顯微鏡觀察其轉導活性.結果 重組pET-28a-EGFP-Arg7經酶切鑒定和序列分析,證明構建正確.轉化E.coil BL21(DE3)後,重組蛋白穫得可溶性錶達.純化後的融閤蛋白純度達90%以上.重組蛋白EGFP-Arg7作用于HeLa細胞後用熒光顯微鏡可觀察到彊綠色熒光.結論 Arg7具有很好的轉導活性,能攜帶與其連接的蛋白質穿過HeLa細胞膜.
목적 구건pET-28a-EGFP-Arg7중조자,관찰표체적융합단EGFP-Arg7재세포내적전도활성.방법 구건EGFP-Arg7(음성대조위EGFP)서렬,여pET-28a련접후,전화Ecoli BL21(DE3),IPTG유도표체,병경Ni2+.NTA순화.순화산물작용우HeLa세포후용형광현미경관찰기전도활성.결과 중조pET-28a-EGFP-Arg7경매절감정화서렬분석,증명구건정학.전화E.coil BL21(DE3)후,중조단백획득가용성표체.순화후적융합단백순도체90%이상.중조단백EGFP-Arg7작용우HeLa세포후용형광현미경가관찰도강록색형광.결론 Arg7구유흔호적전도활성,능휴대여기련접적단백질천과HeLa세포막.
