实验动物与比较医学
實驗動物與比較醫學
실험동물여비교의학
LABORATORY ANIMAL AND COMPARATIVE MEDICINE
2010年
4期
246-250
,共5页
吴红联%张梅英%王惟%王禄增
吳紅聯%張梅英%王惟%王祿增
오홍련%장매영%왕유%왕록증
5-脂氧化酶%基因克隆%真核表达%RAW264.7细胞
5-脂氧化酶%基因剋隆%真覈錶達%RAW264.7細胞
5-지양화매%기인극륭%진핵표체%RAW264.7세포
目的 构建5-LO真核表达载体并初步研究其在RAW264.7细胞中的表达,为建立5-LO高表达转基因小鼠模型提供表达载体.方法 从人全血标本中提取细胞总RNA,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增5-LO基因,分别构建5-LO目的 基因的克隆载体与表达载体,提取质粒,进行酶切、PCR和DNA测序鉴定,将重组融合表达载体pEGFP-5-LO稳定转染RAW264.7细胞,RT-PCR、western blot方法检测pEGFP-5-LO的表达情况.结果 构建了重组克隆载体pUCm-5-LO和真核表达载体pEGFP-5-LO,经酶切、PCR及测序鉴定正确:转染细胞后,在荧光显微镜下观察到pEGFP-5-LO融合蛋白的表达,RT-PCR和Western blot结果表明转染pEGFP-5-LO的RAW264.7细胞中有5-LO的表达.结论 成功克隆了5-LO基因,构建的表达载体pEGFP-5-LO在RAW264.7细胞中表达5-LO蛋白,为进一步5-LO高表达转基因鼠模型的建立和临床应用奠定了基础.
目的 構建5-LO真覈錶達載體併初步研究其在RAW264.7細胞中的錶達,為建立5-LO高錶達轉基因小鼠模型提供錶達載體.方法 從人全血標本中提取細胞總RNA,以逆轉錄聚閤酶鏈反應(RT-PCR)法擴增5-LO基因,分彆構建5-LO目的 基因的剋隆載體與錶達載體,提取質粒,進行酶切、PCR和DNA測序鑒定,將重組融閤錶達載體pEGFP-5-LO穩定轉染RAW264.7細胞,RT-PCR、western blot方法檢測pEGFP-5-LO的錶達情況.結果 構建瞭重組剋隆載體pUCm-5-LO和真覈錶達載體pEGFP-5-LO,經酶切、PCR及測序鑒定正確:轉染細胞後,在熒光顯微鏡下觀察到pEGFP-5-LO融閤蛋白的錶達,RT-PCR和Western blot結果錶明轉染pEGFP-5-LO的RAW264.7細胞中有5-LO的錶達.結論 成功剋隆瞭5-LO基因,構建的錶達載體pEGFP-5-LO在RAW264.7細胞中錶達5-LO蛋白,為進一步5-LO高錶達轉基因鼠模型的建立和臨床應用奠定瞭基礎.
목적 구건5-LO진핵표체재체병초보연구기재RAW264.7세포중적표체,위건립5-LO고표체전기인소서모형제공표체재체.방법 종인전혈표본중제취세포총RNA,이역전록취합매련반응(RT-PCR)법확증5-LO기인,분별구건5-LO목적 기인적극륭재체여표체재체,제취질립,진행매절、PCR화DNA측서감정,장중조융합표체재체pEGFP-5-LO은정전염RAW264.7세포,RT-PCR、western blot방법검측pEGFP-5-LO적표체정황.결과 구건료중조극륭재체pUCm-5-LO화진핵표체재체pEGFP-5-LO,경매절、PCR급측서감정정학:전염세포후,재형광현미경하관찰도pEGFP-5-LO융합단백적표체,RT-PCR화Western blot결과표명전염pEGFP-5-LO적RAW264.7세포중유5-LO적표체.결론 성공극륭료5-LO기인,구건적표체재체pEGFP-5-LO재RAW264.7세포중표체5-LO단백,위진일보5-LO고표체전기인서모형적건립화림상응용전정료기출.
