生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2011年
1期
202-207
,共6页
侯佩莉%关振宏%张茂林%李影%段铭
侯珮莉%關振宏%張茂林%李影%段銘
후패리%관진굉%장무림%리영%단명
GST pull-down%流感病毒PB1-F2蛋白%热休克蛋白40%蛋白质相互作用
GST pull-down%流感病毒PB1-F2蛋白%熱休剋蛋白40%蛋白質相互作用
GST pull-down%류감병독PB1-F2단백%열휴극단백40%단백질상호작용
为体外脸证流感病毒PB1-F2与热休克蛋白Hsp 40相互作用,通过两个方向的GST pull-down试验验证PB1-F2与Hsp40的相互作用.构建GST-多肽融合蛋白原核表达载体pGEX-6P-1-PB1-F2和pGEX-6P-1-Hsp40,并在大肠杆菌(E.co-li)BL21中诱导表达;构建真核表达载体pLEGFP-Hsp40及pCAGGS-PBI-F2,并分别转染293T细胞使其表达Hsp40及PB1-F2触合蛋白,然后进行GST pull-down试验验证二者的相互作用.成功地构建了两种蛋白的各种表达载体,经表达、纯化获得了可溶性的GST-多肽融合蛋白,GST pull-down试验正反两方向都证实了PB1-F2与Hsp40的相互作用,初步证实了流感病毒PB1-F2在体外能与Hsp40发生相互作用.
為體外臉證流感病毒PB1-F2與熱休剋蛋白Hsp 40相互作用,通過兩箇方嚮的GST pull-down試驗驗證PB1-F2與Hsp40的相互作用.構建GST-多肽融閤蛋白原覈錶達載體pGEX-6P-1-PB1-F2和pGEX-6P-1-Hsp40,併在大腸桿菌(E.co-li)BL21中誘導錶達;構建真覈錶達載體pLEGFP-Hsp40及pCAGGS-PBI-F2,併分彆轉染293T細胞使其錶達Hsp40及PB1-F2觸閤蛋白,然後進行GST pull-down試驗驗證二者的相互作用.成功地構建瞭兩種蛋白的各種錶達載體,經錶達、純化穫得瞭可溶性的GST-多肽融閤蛋白,GST pull-down試驗正反兩方嚮都證實瞭PB1-F2與Hsp40的相互作用,初步證實瞭流感病毒PB1-F2在體外能與Hsp40髮生相互作用.
위체외검증류감병독PB1-F2여열휴극단백Hsp 40상호작용,통과량개방향적GST pull-down시험험증PB1-F2여Hsp40적상호작용.구건GST-다태융합단백원핵표체재체pGEX-6P-1-PB1-F2화pGEX-6P-1-Hsp40,병재대장간균(E.co-li)BL21중유도표체;구건진핵표체재체pLEGFP-Hsp40급pCAGGS-PBI-F2,병분별전염293T세포사기표체Hsp40급PB1-F2촉합단백,연후진행GST pull-down시험험증이자적상호작용.성공지구건료량충단백적각충표체재체,경표체、순화획득료가용성적GST-다태융합단백,GST pull-down시험정반량방향도증실료PB1-F2여Hsp40적상호작용,초보증실료류감병독PB1-F2재체외능여Hsp40발생상호작용.
