CAJ | 학술논문

本研究建立了猪肌内前体脂肪细胞的体外培养模型,以期为更深入研究猪肌内脂肪代谢提供新的实验方法.实验采集出生5 d仔猪的背最长肌组织,Ⅱ型胶原酶消化2 h后400目筛网过滤,然后1 500 r/min离心,沉淀用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基(完全培养基)重悬后差速贴壁2 h,弃去原有培养基,加入新的含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基(完全培养基)进行培养.细胞经传代且完全融合48 h后,在完全培养基中添加0.5 mmol/L 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX),1 μmol/L地塞米松(DEX),10 mg/L胰岛素(INS)进行诱导培养48 h,再换以含10 mg/L胰岛素的完全培养基培养48 h,最后换完全培养基继续培养,直至90%的细胞出现脂滴.培养结果:细胞贴壁生长,呈短梭状或棱形,经诱导培养后细胞充脂率高.经形态学观察、生长曲线及油红O脂肪染色法鉴定,证明是肌内前体脂肪细胞.普通PCR及实时荧光定量PCR均检测到了脂联素基因的表达.本研究通过差速贴壁法成功培养了猪肌内前体脂肪细胞,并通过诱导培养重现了其分化、成熟的全过程.
본연구건립료저기내전체지방세포적체외배양모형,이기위경심입연구저기내지방대사제공신적실험방법.실험채집출생5 d자저적배최장기조직,Ⅱ형효원매소화2 h후400목사망과려,연후1 500 r/min리심,침정용함10%태우혈청적DMEM/F12배양기(완전배양기)중현후차속첩벽2 h,기거원유배양기,가입신적함10%태우혈청적DMEM/F12배양기(완전배양기)진행배양.세포경전대차완전융합48 h후,재완전배양기중첨가0.5 mmol/L 3-이정기-1-갑기황표령(IBMX),1 μmol/L지새미송(DEX),10 mg/L이도소(INS)진행유도배양48 h,재환이함10 mg/L이도소적완전배양기배양48 h,최후환완전배양기계속배양,직지90%적세포출현지적.배양결과:세포첩벽생장,정단사상혹릉형,경유도배양후세포충지솔고.경형태학관찰、생장곡선급유홍O지방염색법감정,증명시기내전체지방세포.보통PCR급실시형광정량PCR균검측도료지련소기인적표체.본연구통과차속첩벽법성공배양료저기내전체지방세포,병통과유도배양중현료기분화、성숙적전과정.