植物病理学报
植物病理學報
식물병이학보
ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA
2011年
3期
262-269
,共8页
高三基%杨帆%陈平华%王恒波%徐景升%陈如凯
高三基%楊帆%陳平華%王恆波%徐景升%陳如凱
고삼기%양범%진평화%왕항파%서경승%진여개
甘蔗黄叶病毒%外壳蛋白%序列分析%实时荧光RT-PCR
甘蔗黃葉病毒%外殼蛋白%序列分析%實時熒光RT-PCR
감자황협병독%외각단백%서렬분석%실시형광RT-PCR
甘蔗黄叶病毒(Sugarcane yellow leaf virus,SCYLV)引起的甘蔗黄叶病是一种新的全球性病毒病害.本文以YLSCPF1和YLSCPR591为引物,采用RT-PCR方法克隆了甘蔗黄叶病毒福建分离物(CHN-FJ1)外壳蛋白(CP)基因,编码196个氨基酸.分析不同地理来源的SCYLV病毒分离物cp基因核苷酸及其推导编码的氨基酸序列,同源性达95%以上.根据cp基因的保守序列,设计1对特异性引物和TaqMan探针,建立了SCYLV的TaqMan实时荧光RT-PCR方法.结果表明,检测下限为初始质粒模板DNA1 000拷贝/μL(约3.61 fg/μL),比常规PCR方法的灵敏度提高100倍.检测甘蔗花叶病毒、宿根矮化病菌和黑穗病菌,没有典型的扩增曲线和无Ct值.应用实时荧光RT-PCR、常规RT-PCR和组织印迹免疫杂交(TBIA)对田间甘蔗叶片样品进行检测,阳性检出率分别为100%、61.5%和69.2%,表明该方法比常规RT-PCR和TBIA具有更高的灵敏度,适合于对SCYLV的检测.
甘蔗黃葉病毒(Sugarcane yellow leaf virus,SCYLV)引起的甘蔗黃葉病是一種新的全毬性病毒病害.本文以YLSCPF1和YLSCPR591為引物,採用RT-PCR方法剋隆瞭甘蔗黃葉病毒福建分離物(CHN-FJ1)外殼蛋白(CP)基因,編碼196箇氨基痠.分析不同地理來源的SCYLV病毒分離物cp基因覈苷痠及其推導編碼的氨基痠序列,同源性達95%以上.根據cp基因的保守序列,設計1對特異性引物和TaqMan探針,建立瞭SCYLV的TaqMan實時熒光RT-PCR方法.結果錶明,檢測下限為初始質粒模闆DNA1 000拷貝/μL(約3.61 fg/μL),比常規PCR方法的靈敏度提高100倍.檢測甘蔗花葉病毒、宿根矮化病菌和黑穗病菌,沒有典型的擴增麯線和無Ct值.應用實時熒光RT-PCR、常規RT-PCR和組織印跡免疫雜交(TBIA)對田間甘蔗葉片樣品進行檢測,暘性檢齣率分彆為100%、61.5%和69.2%,錶明該方法比常規RT-PCR和TBIA具有更高的靈敏度,適閤于對SCYLV的檢測.
감자황협병독(Sugarcane yellow leaf virus,SCYLV)인기적감자황협병시일충신적전구성병독병해.본문이YLSCPF1화YLSCPR591위인물,채용RT-PCR방법극륭료감자황협병독복건분리물(CHN-FJ1)외각단백(CP)기인,편마196개안기산.분석불동지리래원적SCYLV병독분리물cp기인핵감산급기추도편마적안기산서렬,동원성체95%이상.근거cp기인적보수서렬,설계1대특이성인물화TaqMan탐침,건립료SCYLV적TaqMan실시형광RT-PCR방법.결과표명,검측하한위초시질립모판DNA1 000고패/μL(약3.61 fg/μL),비상규PCR방법적령민도제고100배.검측감자화협병독、숙근왜화병균화흑수병균,몰유전형적확증곡선화무Ct치.응용실시형광RT-PCR、상규RT-PCR화조직인적면역잡교(TBIA)대전간감자협편양품진행검측,양성검출솔분별위100%、61.5%화69.2%,표명해방법비상규RT-PCR화TBIA구유경고적령민도,괄합우대SCYLV적검측.
