实验动物与比较医学
實驗動物與比較醫學
실험동물여비교의학
LABORATORY ANIMAL AND COMPARATIVE MEDICINE
2012年
1期
1-7
,共7页
郭晓萍%陈时锦%兰干球%蒋钦杨%郭亚芬
郭曉萍%陳時錦%蘭榦毬%蔣欽楊%郭亞芬
곽효평%진시금%란간구%장흠양%곽아분
广西巴马小型猪%α-1,3半乳糖转移酶%真核表达载体%表达鉴定
廣西巴馬小型豬%α-1,3半乳糖轉移酶%真覈錶達載體%錶達鑒定
엄서파마소형저%α-1,3반유당전이매%진핵표체재체%표체감정
目的 通过RT-PCR扩增巴马小型猪GGTA1基因,分析其序列的结构特点并构建真核表达载体,为生产GGTA1基因沉默的广西巴马小型猪奠定基础.方法 根据NCBI上发布的猪α-1,3半乳糖转移酶基因cDNA序列(AF221508),设计合成一对含有 HindⅢ和BamHI酶切位点的特异性引物,以广西巴马小型猪肝脏组织总 RNA为模板进行RT-PCR,所得目的片段经纯化、克隆、鉴定和测序;将目的基因与pEGFP-N 1进行双酶切后连接构建真核表达载体pEGFP-GGTA1,通过测序,双酶切鉴定.结果 所克隆的广西巴马小型猪GGTA1基因存在缺失第五外显子(81-116) 的GGTA1序列,序列全长1 080 bp和未缺失第五外显子的GGTA1序列,全序列为1 116 bp.构建两个表达载体(缺失第五外显子 pEGFP-GGTA1-1、未缺失第五外显子pEGFP-GGTA1-2).结论 广西巴马小型猪GGTA1基因存在第五外显子缺失的现象,通过对GGTA1基因克隆序列进行分析以及构建两个真核表达载体,为后面在猪源PK-15细胞中对其进行表达鉴定以及巴马小型猪 α-1,3半乳糖转移酶基因的沉默实验奠定基础.
目的 通過RT-PCR擴增巴馬小型豬GGTA1基因,分析其序列的結構特點併構建真覈錶達載體,為生產GGTA1基因沉默的廣西巴馬小型豬奠定基礎.方法 根據NCBI上髮佈的豬α-1,3半乳糖轉移酶基因cDNA序列(AF221508),設計閤成一對含有 HindⅢ和BamHI酶切位點的特異性引物,以廣西巴馬小型豬肝髒組織總 RNA為模闆進行RT-PCR,所得目的片段經純化、剋隆、鑒定和測序;將目的基因與pEGFP-N 1進行雙酶切後連接構建真覈錶達載體pEGFP-GGTA1,通過測序,雙酶切鑒定.結果 所剋隆的廣西巴馬小型豬GGTA1基因存在缺失第五外顯子(81-116) 的GGTA1序列,序列全長1 080 bp和未缺失第五外顯子的GGTA1序列,全序列為1 116 bp.構建兩箇錶達載體(缺失第五外顯子 pEGFP-GGTA1-1、未缺失第五外顯子pEGFP-GGTA1-2).結論 廣西巴馬小型豬GGTA1基因存在第五外顯子缺失的現象,通過對GGTA1基因剋隆序列進行分析以及構建兩箇真覈錶達載體,為後麵在豬源PK-15細胞中對其進行錶達鑒定以及巴馬小型豬 α-1,3半乳糖轉移酶基因的沉默實驗奠定基礎.
목적 통과RT-PCR확증파마소형저GGTA1기인,분석기서렬적결구특점병구건진핵표체재체,위생산GGTA1기인침묵적엄서파마소형저전정기출.방법 근거NCBI상발포적저α-1,3반유당전이매기인cDNA서렬(AF221508),설계합성일대함유 HindⅢ화BamHI매절위점적특이성인물,이엄서파마소형저간장조직총 RNA위모판진행RT-PCR,소득목적편단경순화、극륭、감정화측서;장목적기인여pEGFP-N 1진행쌍매절후련접구건진핵표체재체pEGFP-GGTA1,통과측서,쌍매절감정.결과 소극륭적엄서파마소형저GGTA1기인존재결실제오외현자(81-116) 적GGTA1서렬,서렬전장1 080 bp화미결실제오외현자적GGTA1서렬,전서렬위1 116 bp.구건량개표체재체(결실제오외현자 pEGFP-GGTA1-1、미결실제오외현자pEGFP-GGTA1-2).결론 엄서파마소형저GGTA1기인존재제오외현자결실적현상,통과대GGTA1기인극륭서렬진행분석이급구건량개진핵표체재체,위후면재저원PK-15세포중대기진행표체감정이급파마소형저 α-1,3반유당전이매기인적침묵실험전정기출.
