遗传
遺傳
유전
HEREDITAS(BEIJING)
2012年
4期
445-453
,共9页
陈时锦%范晶%蒋钦杨%兰干球%郭晓萍%郭亚芬
陳時錦%範晶%蔣欽楊%蘭榦毬%郭曉萍%郭亞芬
진시금%범정%장흠양%란간구%곽효평%곽아분
广西巴马小型猪%启动子%功能验证
廣西巴馬小型豬%啟動子%功能驗證
엄서파마소형저%계동자%공능험증
为了探讨巴马小型猪启动子U6 和7SK 的功能以及为生产GGTA1 基因沉默的广西巴马小型猪奠定基础,文章克隆并分析了siRNA 启动子U6 和7SK,并分别连接pMD18-shEGFP 载体,分别与PEGFP-N1 共转猪肾细胞,进行RNAi 实验.以pMD18-hU6-shEGFP 为阳性对照,无启动子的pMD18-shEGFP 载体为阴性对照,单独转染PEGFP-N1 为第一组空白对照,以ddH2O 替代质粒为第二组空白对照组,验证这两种启动子在猪细胞中的功能.结果表明:广西巴马小型猪RNA 聚合酶III 型siRNA 启动子U6 和7SK 的序列全长分别为553 bp 和437bp.成功构建了pMD18-pU6-shEGFP 和pMD18-p7SK-shEGFP 干扰载体,转染猪源PK-15 细胞,证明U6 以及7SK 两个启动子具有较高的siRNA 表达活性,可以用于α-1,3 半乳糖转移酶等猪源基因的沉默实验.
為瞭探討巴馬小型豬啟動子U6 和7SK 的功能以及為生產GGTA1 基因沉默的廣西巴馬小型豬奠定基礎,文章剋隆併分析瞭siRNA 啟動子U6 和7SK,併分彆連接pMD18-shEGFP 載體,分彆與PEGFP-N1 共轉豬腎細胞,進行RNAi 實驗.以pMD18-hU6-shEGFP 為暘性對照,無啟動子的pMD18-shEGFP 載體為陰性對照,單獨轉染PEGFP-N1 為第一組空白對照,以ddH2O 替代質粒為第二組空白對照組,驗證這兩種啟動子在豬細胞中的功能.結果錶明:廣西巴馬小型豬RNA 聚閤酶III 型siRNA 啟動子U6 和7SK 的序列全長分彆為553 bp 和437bp.成功構建瞭pMD18-pU6-shEGFP 和pMD18-p7SK-shEGFP 榦擾載體,轉染豬源PK-15 細胞,證明U6 以及7SK 兩箇啟動子具有較高的siRNA 錶達活性,可以用于α-1,3 半乳糖轉移酶等豬源基因的沉默實驗.
위료탐토파마소형저계동자U6 화7SK 적공능이급위생산GGTA1 기인침묵적엄서파마소형저전정기출,문장극륭병분석료siRNA 계동자U6 화7SK,병분별련접pMD18-shEGFP 재체,분별여PEGFP-N1 공전저신세포,진행RNAi 실험.이pMD18-hU6-shEGFP 위양성대조,무계동자적pMD18-shEGFP 재체위음성대조,단독전염PEGFP-N1 위제일조공백대조,이ddH2O 체대질립위제이조공백대조조,험증저량충계동자재저세포중적공능.결과표명:엄서파마소형저RNA 취합매III 형siRNA 계동자U6 화7SK 적서렬전장분별위553 bp 화437bp.성공구건료pMD18-pU6-shEGFP 화pMD18-p7SK-shEGFP 간우재체,전염저원PK-15 세포,증명U6 이급7SK 량개계동자구유교고적siRNA 표체활성,가이용우α-1,3 반유당전이매등저원기인적침묵실험.
