CAJ | 학술논문

目的:制备幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)重组VacA的鸡蛋黄抗体IgY(VacA-IgY),了解其理化特性和生物学活性,评价其抗Hpylori感染的作用.方法:以纯化的重组VacA免疫产蛋鸡,水稀释法提取蛋黄抗体(VacA-IgY),硫酸铵沉淀法纯化IgY.将一定浓度的VacA-IgY在不同温度的水浴中维持一定时间,评价其耐热性;在不同pH的Tris-HCl中孵育一定时间,评价其耐酸性;加入胃蛋白酶并作用一定时间后,评价其对酶消化的耐受作用.以上评价均采用ELISA法测定抗体效价变化.采用Hela细胞体外培养MTT法分析VacA-IgY对Hpylori细胞毒活性的中和作用.结果:本实验制备的VacA-IgY在70℃水浴15 min后活性保持约50%;在pH≥5时,抗体活性几乎无改变,pH＜5时,抗体活性下降较快,pH2.0左右,抗体活性几乎丧失;pH4.0时,60 kU/L胃蛋白酶作用1 h,抗体活性几乎无变化,2 h后活性仍保持50%以上.VacA-IgY能浓度依赖性地中和H pylori菌体蛋白的Hela细胞毒活性.20 mg/L超声提取物即可降低1/2的Hela细胞增殖能力,80-320 mg/L的VacA-IgY能完全中和Hpylori菌体蛋白的Hela细胞毒活性(P＜0.01).结论:成功制备了重组VacA的IgY,且具有较好的耐热性、耐胃酶消化和一定的耐酸性;在其体外具有中和H pylori细胞毒活性的作用.
목적:제비유문라간균(Helicobacter pylori)중조VacA적계단황항체IgY(VacA-IgY),료해기이화특성화생물학활성,평개기항Hpylori감염적작용.방법:이순화적중조VacA면역산단계,수희석법제취단황항체(VacA-IgY),류산안침정법순화IgY.장일정농도적VacA-IgY재불동온도적수욕중유지일정시간,평개기내열성;재불동pH적Tris-HCl중부육일정시간,평개기내산성;가입위단백매병작용일정시간후,평개기대매소화적내수작용.이상평개균채용ELISA법측정항체효개변화.채용Hela세포체외배양MTT법분석VacA-IgY대Hpylori세포독활성적중화작용.결과:본실험제비적VacA-IgY재70℃수욕15 min후활성보지약50%;재pH≥5시,항체활성궤호무개변,pH＜5시,항체활성하강교쾌,pH2.0좌우,항체활성궤호상실;pH4.0시,60 kU/L위단백매작용1 h,항체활성궤호무변화,2 h후활성잉보지50%이상.VacA-IgY능농도의뢰성지중화H pylori균체단백적Hela세포독활성.20 mg/L초성제취물즉가강저1/2적Hela세포증식능력,80-320 mg/L적VacA-IgY능완전중화Hpylori균체단백적Hela세포독활성(P＜0.01).결론:성공제비료중조VacA적IgY,차구유교호적내열성、내위매소화화일정적내산성;재기체외구유중화H pylori세포독활성적작용.